[发明专利]一种抗小鹅瘟病毒转移因子的制备方法

权利要求书

1.一种抗小鹅瘟病毒转移因子的制备方法，其特征在于：将小鹅瘟病毒接种于鹅胚的尿囊腔中进行增殖，提取病毒制备抗原；然后将提取的病毒抗原免疫健康猪，再从被免疫猪的免疫器官中提取抗小鹅瘟病毒转移因子，具体制备步骤如下：

1）小鹅瘟病毒抗原的制备：将小鹅瘟病毒接种于12-14日龄鹅胚的尿囊腔中进行增殖，35℃，培养3-5天，提取尿腔液和绒尿膜，研磨超声波处理后，经6000-8000r/min离心，弃沉淀留上清液，得到病毒粗抗原；

2）纯化抗原：将病毒粗抗原液加入到不连续梯度密度为20-60%的蔗糖离心管上，经过超速心处理，根据小鹅瘟病毒粒子的大小确定病毒带所在离心管的位置，吸取病毒抗原，透析除去抗原中的蔗糖，得到纯病毒抗原备用；

3）病毒抗原免疫猪：随机选取健康的猪，随机选取，按病毒抗原病毒滴度制定接种剂量，采用皮下多点注射接种方式，免疫3次，每次间隔一周，然后从宰杀猪中无菌取其脾脏、胸腺、淋巴组织，放置-20℃保存；

4）从被免疫猪中提取抗小鹅瘟病毒转移因子：

①将所取的脾脏、胸腺、淋巴组织经过无菌去离子水清洗干净，然后剔净脏器表面的筋膜及脂肪组织，再用PH为6.8-7.2的PBS缓冲液清洗干净。

②将洗干净的组织剪成小块之后放入到组织匀浆机中，再加入2-3倍预冷的0.85%生理盐水，1500-2000r/min转速，每次2 min，经过不去次匀浆，制得匀浆液；

③匀浆液经过-60_- -80℃快速冷冻,再快速解冻，经过4-5次的冻融，然后将冻融后的溶液放到低温超声波细胞破碎仪中破碎3s停3s，经过20min破碎，得到精细的匀浆液，再加3倍的冷生理盐水，混匀，经过低温7000-8000r/min离心10min，取上清液，经过滤处理，留滤液备用；

④用稀盐酸将滤液酸度值调PH为5.4-5.6，净化滤液，将净化后的滤液用0.22um滤膜过滤后收集，再将上述的滤液经过截留分子量为6000道尔顿的中空纤维膜超滤，收集后滤液再次用滤膜进行无菌过滤，即为抗小鹅瘟病毒转移因子。

2.根据权利要求1所述的一种抗小鹅瘟病毒转移因子的制备方法，其特征在于：步骤2）所述的蔗糖溶液分为4个递增的蔗糖浓度梯度，分别为20-25%、30-35%、40-45%、55-60%。

3.根据权利要求1所述的一种抗小鹅瘟病毒转移因子的制备方法，其特征在于：步骤3）所述取免疫猪的脾脏、胸腺、淋巴等组织之前，根据免疫学的方法检测抗原在体内产生的特异性抗体效价后，再取猪的免疫组织。