[发明专利]一种检测环丙沙星的酶联免疫试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测环丙沙星的酶联免疫试剂盒，其特征在于：它由带有微孔的包被板，环丙沙星标准品，抗环丙沙星的包被抗体，环丙沙星酶标抗原，浓缩洗涤液，显色液A，显色液B和终止液组成；所述的包被板配置有采用1％明胶作为封闭液，抗体的稀释液选用0.15mol/L的磷酸盐缓冲溶液，所述的浓缩洗涤液为含有0.07％～0.1％吐温的Tris-HCL缓冲溶液，显色液A为柠檬酸和柠檬酸钠缓冲溶液，显色液B为四甲基联苯胺和二甲基亚砜、含甘油的溶液，所述的终止液为2mol/L的硫酸溶液。

2.根据权利要求1所述的检测环丙沙星的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述的环丙沙星酶标抗原，是用EDC法以辣根过氧化物酶(HRP)与CPLX合成酶标抗原(CPLX-HRP)，并利用紫外分光光度计进行鉴定。

3.根据权利要求1所述的检测环丙沙星的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述的环丙沙星标准品，是从干粉中稀释得到，稀释液为0.15mol/L的磷酸盐缓冲溶液，共6瓶，环丙沙星浓度分别为：0ug/L，1ug/L，2.5ug/L，10ug/L，200ug/L。

4.根据权利要求1所述的检测环丙沙星的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述的抗环丙沙星包被抗体为多克隆抗体，它们均是用环丙沙星半抗原与载体蛋白的偶联物作为免疫原得到的；所述的环丙沙星半抗原是将环丙沙星和EDC法作用得到的；所述的载体蛋白为匙孔蓝蛋白。

5.一种用权利要求1所述的试剂盒检测环丙沙星的方法，其特征是取包被抗环丙沙星-KLH抗体的微孔包被板，加入环丙沙星标准品或处理好的样品到各自的微孔中，再加入酶标的环丙沙星抗原，震荡反应，洗涤液洗涤，加显色液A和显色液B，避光放置后加终止液，在450nm-630nm处测量吸光值(OD值)，对照标准曲线计算样品中的环丙沙星含量。

6.根据权利要求5所述的检测环丙沙星的方法，其特征在于：它是取包被有抗环丙沙星-KLH抗体的微孔包被板，用洗涤液洗涤1次，加入100ul环丙沙星标准品和处理好的样品到各自的微孔中，同时加入50ul酶标环丙沙星抗原，震荡混匀，37℃孵育10分钟左右，洗涤液洗涤三次，加50ul显色液A和50ul显色液B，37℃孵育15分钟后加终止液，在450nm-630nm处测量吸光值(OD值)，对照标准曲线计算样品中的环丙沙星含量。

7.根据权利要求5或6所述的检测环丙沙星的方法，其特征在于所述的样品处理是根据猪肉、猪肝、虾、鱼、甲鱼、鸡肉、鸡蛋这些样品选择优化的前处理方法，包括：样品切碎、研磨后各称取5g样本于50ml离心管中，再加入乙腈10ml，充分振荡混匀5分钟，4500转离心5分钟。取上清液2ml于15ml离心管中50℃氮气吹干。加1ml正己烷，振荡10秒，再加入2mlPBS，振荡2分钟，4500转离心5分钟，去除上层有机相，取1.5ml左右下层液于离心管中备用。