[发明专利]一种从湖泊沉积物样品中提取纯化总DNA的高效方法无效
| 申请号： | 201210137580.X | 申请日： | 2012-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN103374566A | 公开（公告）日： | 2013-10-30 |
| 发明（设计）人： | 赵吉;李靖宇 | 申请（专利权）人： | 内蒙古大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 010021 内蒙古*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 湖泊 沉积物 样品 提取 纯化 dna 高效 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种沉积物环境样品总DNA快速提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取0.3g-1.0g左右沉积物土样于装有三颗2.5mm灭菌玻璃珠的2mL的离心管中，300-1000μLDNA提取缓冲液(100mmol/L Tris-HCl，1.5mol/L NaCl，1％CTAB，pH 8.0)，再加入50-500μL重铬酸钾溶液(0.05mol/L-3mol/L)，使用Vortex-2(Mobio Laboratories Inc)涡旋10s-1min，加入50-300μLSDS溶液(5％-20％)，涡旋3min，65℃温育5-60min；
(2)加入50-200μL氯化钾溶液(0.05mol/L-5mol/L)，上下剧烈颠倒混匀数次，12000r/min离心2min；
(3)取上清1000μL于2mL离心管中，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)，12000r/min离心5min；
(4)取上清900μL于1.5mL离心管中，加入0.6倍体积的异丙醇，冰浴10min，12000r/min离心5min；
(5)弃上清，用70％的酒精洗沉淀，自然干燥或冷冻干燥；
(6)50μLTE溶解沉淀。
2.步骤1中重铬酸钾溶液(0.05mol/L-3mol/L)。
3.步骤2中氯化钾溶液(0.05mol/L-5mol/L)。
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