[发明专利]汉滩病毒糖蛋白特异性T细胞表位肽及其应用

说明书

技术领域

本发明属于汉滩病毒的防治技术领域，涉及汉滩病毒糖蛋白特异性的CD4⁺T细胞表位肽和CTL表位肽及其应用。

背景技术

汉滩病毒（hantaan virus，HTNV）是《禁止生物武器公约》议定书核查范围的病原微生物中一种重要的病毒，属于布尼亚病毒科汉坦病毒属（Hantavirus，HTV），是HTV的原型。HTV属病毒均为单股负链RNA有包膜病毒，基因组包括大（L）、中（M）、小（S）三个片段，其中L片段编码RNA聚合酶，M片段编码包膜糖蛋白1和2（glycoprotein 1,G1/Gn和glycoprotein 2,G2/Gc），S片段编码核蛋白（nucleocapsid protein，NP）。1978年李镐汪等首先分离出的HTNV 76-118株是HTNV的代表株，也是在我国引起肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS）的主要病原体之一。

HFRS是一种急性自限性疾病，但发病机理尚不清楚。HFRS是一种以发热、出血和急性肾功能损害为特征的急性传染病，典型病例可有发热期、低血压休克期、少尿期、多尿期和恢复期五期经过，同时存在有大量轻型非典型病例，并可见多种非典型的特殊临床表现。人群对HTNV有较普遍的易感性，在人口密集，带病毒鼠数量多的条件下容易出现爆发和流行。全球每年HFRS发病人数达10万例，死亡率在2%~10%左右，90%以上病例发生在我国，已成为我国目前死亡人数最多的传染病之一。HFRS在我国分布广，发病率和病死率较高，并且新疫区仍不断出现，在广大农村、城镇和林区部分疫点还时有爆发，严重危害我国人民的生命和健康，威胁和影响工农业生产、经济开发、外贸及旅游事业的发展，是国家重点防治的传染病之一。

在HTNV的三种结构蛋白中，HTNV糖蛋白（Gn/Gc）通过其C端黏附于病毒包膜上。由于Gn/Gc位于病毒衣壳的外层，其特异性抗体可直接与之结合，从而参与机体对病毒的免疫清除。但研究发现，尽管小鼠体内存在特异性中和抗体，仍会表现为病毒持续感染。病毒是胞内感染病原体，抗体分子不易进入细胞内，不能对胞内病毒发挥免疫清除功能，因此对胞内感染的病毒颗粒的免疫清除还主要依靠细胞免疫来执行。在病毒感染过程中，T细胞通过识别抗原提呈细胞（antigen-presenting cell,APC）表面的主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）-Ⅰ类或Ⅱ类分子与抗原肽表位形成的复合体，发挥清除病原体的效应。HTNV特异性CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞（细胞毒性T细胞，cytotoxic T lymphocyte,CTL）在清除病毒和HFRS的发病机制中均发挥重要作用。CD8+T细胞是抗病毒免疫的主要效应细胞，可通过穿孔素途径和死亡受体途径以及分泌细胞因子杀伤病毒感染细胞，引起病毒感染细胞凋亡。特异性CD4⁺T细胞尤其是Th1细胞则通过分泌细胞因子调节CD8⁺T细胞介导的抗病毒免疫，对辅助CD8⁺T细胞的活化至关重要。HTNV感染所诱导的特异性CTL识别与MHC-Ⅰ类分子结合的内源性肽，长度多为8-10个氨基酸。HTNV感染所诱导的特异性CD4⁺T细胞则识别与MHC-Ⅱ类分子结合的长度多为13-17个氨基酸的肽段。

尽管细胞免疫应答在HFRS发生、发展和疾病的转归中起着重要作用，但迄今为止，对HTNV结构蛋白上的T细胞表位的研究只有零星报道。这种研究现状大大限制了人们对HTNV感染后适应性免疫应答规律及其与免疫保护或免疫损伤关系的认识，也限制了人们利用多肽疫苗对疾病进行治疗及控制的研究。

合成肽疫苗是近年来出现的新型疫苗研究方向，合成肽能够直接与MHC分子结合，而不需要APC的加工处理，它与天然的内源性肽在激活免疫系统方面具有相同的效果，因此合成肽疫苗广泛应用于抗病毒免疫治疗。目前已有多种基于多肽表位的合成肽疫苗进入临床研究阶段或已上市。

建立在T细胞表位鉴定基础之上的T细胞表位肽疫苗，由于人工合成多肽不包含病原生物的无关成分，只诱导特异性T细胞应答，因此安全、稳定、毒副作用少，且研制周期大大缩短。更重要的是，基于T细胞表位研发的多个T细胞表位组合，还可设计针对一种或多种病原体的多价T细胞表位肽疫苗。因此T细胞表位合成肽疫苗已成为防治HTNV感染研究的一个新策略，而对HTNV特异的T细胞表位进行鉴定即成为疫苗研究的前提和关键。