[发明专利]诱导性表达多能性维持基因的有蹄类动物细胞系及其构建无效
| 申请号： | 201210140857.4 | 申请日： | 2012-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN103388008A | 公开（公告）日： | 2013-11-13 |
| 发明（设计）人： | 吴璐 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海生命科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;C12N15/873 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200031 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 诱导性 表达 多能 维持 基因 有蹄类 动物 细胞系 及其 构建 | ||
1.一种在有蹄类动物成纤维细胞中表达oct4基因的方法，其特征在于，包括：
(1)提供慢病毒质粒1，其中含有以下操作性连接的元件：ef1α，rtta，IRES，EGFP；以及慢病毒质粒2，其中含有以下操作性连接的元件：ef1α，EGFP，TRE，Oct4；
(2)将慢病毒质粒1和慢病毒质粒2共同转染有蹄类动物成纤维细胞，选择EGFP阳性的细胞，该细胞是能表达oct4基因的有蹄类动物成纤维细胞。
2.如权利要求2所述的方法，其特征在于，还包括步骤：
(3)利用强力霉素处理步骤(2)获得的有蹄类动物成纤维细胞，诱导有蹄类动物成纤维细胞表达oct4基因。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，还包括步骤：
(4)从步骤(3)获得的EGFP阳性细胞中，选择oct4基因高表达的有蹄类动物成纤维细胞。
4.如权利要求3的方法，其特征在于，利用聚合酶链反应来确定所述的有蹄类动物成纤维细胞的oct4基因表达量。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的慢病毒质粒1和慢病毒质粒2以(1～2)∶(1～2)混合。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的慢病毒质粒1和慢病毒质粒2以MOI 1.5-3感染有蹄类动物成纤维细胞。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的有蹄类动物是猪。
8.一种可诱导表达oct4基因的有蹄类动物成纤维细胞，其特征在于，所述的细胞中转染有慢病毒质粒1，其中含有以下操作性连接的元件：ef1α，rtta，IRES，EGFP；以及慢病毒质粒2，其中含有以下操作性连接的元件：ef1α，EGFP，TRE，Oct4。
9.如权利要求8所述的有蹄类动物成纤维细胞，其特征在于，其由权利要求1-7任一所述的方法制备获得。
10.权利要求8所述的有蹄类动物成纤维细胞的用途，用于作为核移植的供体细胞。
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