[发明专利]高产香紫苏醇菌株的构建方法

权利要求书

1.高产香紫苏醇菌株的构建方法，其特征在于：增加宿主香紫苏醇合成的前体物质——双牻牛基焦磷酸(GGPP)，进而使更多的GGPP流向香紫苏醇的合成过程；

所述宿主为酿酒酵母。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于：

所述酿酒酵母工程菌株构建过程如下：

1)将香紫苏醇合成关键酶基因在酿酒酵母中表达；进而使更多的GGPP流向香紫苏醇的合成过程；

关键酶基因为：焦磷酸赖百当烯二醇酯合酶基因(LPPs)和香紫苏醇合酶基因(Tps)；

2)将GGPP合成的相关酶基因在酿酒酵母中过表达；进而增加宿主香紫苏醇合成的前体物质；

相关酶基因为：羟甲基辅酶A还原酶基因(HMG1)、法尼基焦磷酸合酶基因(ERG20)和双牻牛基焦磷酸合酶基因(BTS1)中的一个或二个以上酶基因的组合。

3.根据权利要求2的方法，其特征在于：

所述的基因LPPs和Tps，按照酿酒酵母密码子偏好性进行优化，优化后序列如序列1和2所示，优化后序列于酿酒酵母中单独表达或共表达或融合表达，表达全长或N端截短的蛋白，LPPs蛋白N端截短长度为50-70aa，Tps蛋白N端截短长度为40-60aa。

4.根据权利要求2的方法，其特征在于：

所述的基因HMG1于酿酒酵母中过表达全长或N端截短的蛋白，N端截短长度为520-540aa；所述的基因ERG20和BTS1于酿酒酵母中单独过表达或共过表达或融合过表达。

5.根据权利要求2的方法，其特征在于：

关键酶基因在酿酒酵母中表达，关键酶基因为：焦磷酸赖百当烯二醇酯合酶基因(LPPs)和香紫苏醇合酶基因(Tps)，基因的拷贝数分别由0增加到10-20个；

相关酶基因在酿酒酵母中过表达，基因的拷贝数由1个增加到10-20个。

6.根据权利要求2的方法，其特征在于：将获得的基因工程菌株在YPD培养液中，30℃，200rpm培养48-72h，加入与培养液等体积的正己烷，震荡混匀0.5-1h，离心分层，取上层有机相，旋蒸浓缩后即为含有香紫苏醇的粗品。

7.根据权利要求6的方法，其特征在于：所述生产的香紫苏醇，可作为香料的有效成分或龙涎香等香料的前体化合物，用于香水、化妆品、调味原料等领域；可作为抗菌、抗炎症、抗肿瘤等医药品或医药品前体化合物，用于医药卫生等领域。