[发明专利]一种独一味组织培养离体快速繁殖方法

权利要求书

1.一种独一味组织培养离体快速繁殖方法，包括以下步骤：

⑴外植体的选择和消毒处理：选颗粒饱满的独一味种子，52℃的水浴锅内恒温浴12min，置于500ppm赤霉素溶液中浸泡1h后，用体积浓度为75%的酒精浸泡灭菌15~30秒，然后以无菌去离子水冲洗2~3次，再将冲洗后的种子置于质量浓度为0.1%~0.2%的升汞中，浸泡灭菌5~8分钟，并用无菌去离子水冲洗3~6次后接种到MS无激素培养基上，其中每25ml所述MS无激素培养基中接种4粒所述消毒后的种子；3~4天后种子开始萌发，10天后将萌发的无菌苗的幼根作为初始培养外植体；

⑵外植体接种：将所述外植体切成0.3~0.5cm长的小段，接种在愈伤组织诱导培养基上，其中每25ml所述愈伤组织诱导培养基中接种2小段所述外植体；在温度为25℃±2℃、光照强度为30~60 umol . m^-2. s^-1、光照时间为12~14 h .d^-1的条件下培养10~25天，在幼根两端切口处膨大形成愈伤组织；

⑶愈伤组织增殖：将所述愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基上，其中每25ml所述愈伤组织增殖培养基中接种2块所述愈伤组织；在温度为25℃±2℃、光照强度为30~60 umol . m^-2. s^-1、光照时间为12~14 h .d^-1的条件下愈伤组织增殖20~35天，长出浅黄色、颗粒状致密的愈伤组织；

⑷愈伤组织的芽诱导：将所述步骤⑶所得的愈伤组织接种到诱芽培养基上，其中每25ml所述诱芽培养基中接种2块所述愈伤组织；在温度为25℃±2℃、光照强度为30~60 umol . m^-2. s^-1、光照时间为12~14 h .d^-1的条件下培养30~35天，形成丛生芽；

⑸丛生芽的增殖：将所述丛生芽接种到芽增殖培养基上，其中每25ml所述芽增殖培养基中接种1棵所述丛生芽；在温度为25℃±2℃、光照强度为30~60 umol . m^-2. s^-1、光照时间为12~14 h .d^-1的条件下培养30~35天，形成生长健壮的独一味苗；

⑹生根诱导：将所述丛生独一味苗进行分株，后转入生根培养基中，其中每25ml所述生根培养基中接种1棵所述丛生独一味苗；在温度为25℃±2℃、光照强度为30~60 umol . m^-2. s^-1、光照时间为12~14 h .d^-1的的条件下培养20~30天后，小苗基部出现白色、粗壮短根，并长出完整根系，即得完整再生小苗；

⑺育苗基质消毒：将育苗基质在115~121℃温度下进行高温消毒，15~20min后即得消毒后的育苗基质；所述育苗基质是指腐殖质与珍珠岩按2：1重量比混合而成的混合基质；

⑻植株移栽：将所述完整再生小苗直接移栽到所述消毒后的育苗基质中，炼苗后即长成正常独一味植株；所述一棵完整再生小苗种植在所述消毒后的育苗基质10cm²的范围内。

2.如权利要求1所述的一种独一味组织培养离体快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤⑴中的独一味为唇形科独一味属多年生草本植物。

3.如权利要求1所述的一种独一味组织培养离体快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤⑴中的MS无激素培养基是指在1000ml的烧杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有机成分母液10ml，铁盐母液5ml，柠檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，后加双蒸馏水至1000ml刻度处，搅匀后，加入1mM NaOH溶液调整pH值至5.8，最后加入琼脂粉6.0克，在100ml三角瓶中每25ml分装为一瓶，经121℃高温消毒即得。