[发明专利]一种羌活组织培养离体快速繁殖方法

权利要求书

1.一种羌活组织培养离体快速繁殖方法，包括以下步骤：

⑴外植体的选择和消毒处理：以羌活的幼叶为外植体，经流水冲洗10~20分钟，再用体积浓度为75%的酒精浸泡灭菌15~30秒，然后以无菌去离子水冲洗2~3次，再将冲洗后的外植体置于质量浓度为0.1%~0.2%的升汞中，浸泡灭菌5~8分钟，并用无菌去离子水冲洗3~6次，即得消毒后的外植体；

⑵外植体接种：将所述消毒后的外植体切成0.1~0.5cm²的小块，接种在愈伤组织诱导培养基上，其中每25ml所述愈伤组织诱导培养基中接种3小块所述消毒后的外植体；在温度为20℃±2℃、光源为日光灯、光强为30~60 umol . m^-2. s^-1、光照时间为12 h .d^-1的条件下培养10~25天，在幼叶切口处膨大形成愈伤组织；

⑶愈伤组织增殖：将所述愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基上，其中每25ml所述愈伤组织增殖培养基中接种2块所述愈伤组织；在温度为20℃±2℃、光源为日光灯、光强为30~60 umol . m^-2. s^-1、光照时间为12 h .d^-1的条件下愈伤组织增殖20~35天，长出乳白色、颗粒状致密性的愈伤组织；

⑷愈伤组织的芽诱导：将所述步骤⑶所得到的愈伤组织接种到诱芽培养基上，其中每25ml所述诱芽培养基中接种2块所述愈伤组织；在温度为20℃±2℃、光源为日光灯、光强为30~60 umol . m^-2. s^-1、光照时间为12 h .d^-1的条件下培养30~35天，形成丛生羌活苗；

⑸生根诱导：将所述丛生羌活苗分株后转入生根培养基中，其中每25ml所述生根培养基中接种1棵所述丛生羌活苗；在温度为20℃±2℃、光源为日光灯、光强为30~60 umol . m^-2. s^-1、光照时间为12 h .d^-1的条件下培养20~30天后，小苗基部出现白色、粗壮短根，并长出完整根系，即得完整再生小苗；

⑹育苗基质消毒：将育苗基质在115~121℃温度下进行高温消毒，15~20min后即得消毒后的育苗基质；所述育苗基质是指腐殖质与珍珠岩按2：1重量比混合而成的混合基质；

⑺植株移栽：将所述完整再生小苗直接移栽到所述消毒后的育苗基质中，炼苗后即长成正常羌活植株；所述一棵完整再生小苗种植在所述消毒后的育苗基质10cm²的范围内。

2.如权利要求1所述的一种羌活组织培养离体快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤⑴中的羌活的基源植物为伞形科多年生草本植物羌活。

3.如权利要求1所述的一种羌活组织培养离体快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤⑵中的愈伤组织诱导培养基是指在1000ml的烧杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有机成分母液10ml，铁盐母液5ml，柠檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，浓度为0.1mg/ml的2,4-二氯苯氧乙酸母液5~20ml，浓度为0.1mg/ml的萘乙酸母液2~10ml，后加双蒸馏水至1000ml刻度处，搅匀后，加入1mM NaOH溶液调整pH值至5.8，最后加入琼脂粉6.0~8.0克，在100ml三角瓶中每25ml分装为一瓶，经121℃高温消毒即得。

4.如权利要求1所述的一种羌活组织培养离体快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤⑶中的愈伤组织增殖培养基是指在1000ml的烧杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有机成分母液10ml，铁盐母液5ml，柠檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，浓度为0.1mg/ml的2,4-二氯苯氧乙酸母液10~15ml，浓度为0.1mg/ml的萘乙酸母液5~10ml，后加双蒸馏水至1000ml刻度处，搅匀后，加入1mM NaOH溶液调整pH值至5.8，最后加入琼脂粉6.0~8.0克，在100ml三角瓶中每25ml分装为一瓶，经121℃高温消毒即得。