[发明专利]醋糟基质栽培中菌根真菌与拮抗菌联用抗枯萎病的方法

权利要求书

1.菌根真菌及拮抗菌联用提高醋糟基质栽培抗黄瓜枯萎病的方法，其特征在于按照下述步骤进行：

一、抗性菌剂芽孢杆菌的制备：

（1） 配置固体平板酵母膏蛋白胨培养基，于30℃ 下培养对芽孢杆菌生防菌株进行活化；

（2）将活化的菌体接种于含有2/5 酵母膏蛋白胨液体培养基的三角瓶中，30℃、200 rpm摇至对数期，取对数期菌液，7000 rpm离心 10min，取沉淀，加水将细菌重悬浮液调成l×10⁸CFU/ ml；

其中所述的酵母膏蛋白胨液体培养基组成如下：酵母提取物5 g/l、蛋白胨10 g/l、NaCl l0 g/l；

二、菌根真菌菌剂的制备：

（1）将菌根真菌Glomus intraradices无菌体系，用10 mM柠檬酸钠溶液以1: 10的体积混合溶解其中的植物凝胶，然后提取其中的菌根真菌孢子；

（2）将上步获得的菌根真菌孢子，接种到按泥：沙体积比为1：3混合的灭菌土壤中，浇水后播种玉米作为共生作物，覆土100g，常规培养3个月后，获得大量的菌根真菌菌剂；

三、菌根真菌及拮抗菌联用双接种连作的醋糟基质：

（1）用质量比为2：1：1的新鲜醋糟：蛭石：草炭混合配置的育苗基质，进行常规穴盘育苗；

（2）将上述步骤一和二中分别制取得到的抗性菌剂芽孢杆菌和菌根真菌，分别按不同的比例添加到连作3年的醋糟基质中，其中菌根真菌菌剂按醋糟基质的质量比为3%添加，拮抗菌按保证醋糟中含有l×10⁵CFU/ g的菌体密度添加，将添加的菌根真菌和拮抗菌与醋糟基质充分混匀；

（3）待穴盘出苗长至4片真叶时，将小苗移栽至上述添加有菌根真菌和拮抗菌的醋糟基质中。

2.根据权利要求1所述的菌根真菌及拮抗菌联用提高醋糟基质栽培抗黄瓜枯萎病的方法，其特征在于其中步骤一中的（1）酵母膏蛋白胨培养基组成为酵母提取物5 g/l、蛋白胨10 g/l、NaCl l0 g/l，其余为水。

3.根据权利要求1所述的菌根真菌及拮抗菌联用提高醋糟基质栽培抗黄瓜枯萎病的方法，其特征在于其中步骤一中的（1）芽孢杆菌生防菌株为枯草芽孢杆菌B. subtilis JSB1。