[发明专利]NICD基因的新应用以及一种提高真核细胞抗CVB感染能力的方法及药物

权利要求书

1.Notch蛋白胞内区基因（NICD）在制备提高真核细胞抗CVB感染能力药物中的应用。

2.一种提高真核细胞抗CVB感染能力的药物，其活性成分为携带有Notch蛋白胞内区基因（NICD）的重组DNA质粒或该重组DNA质粒转染的真核细胞，优选上皮细胞，实验选择HeLa细胞。

3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于：所述重组DNA质粒为以pEGFP-N3为出发质粒，将所述NICD基因导入该出发质粒中得到，命名为pEGFP/NICD。

4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于：所述重组DNA质粒转染的HeLa细胞为pEGFP/NICD转染HeLa细胞得到，命名为：HeLa-pEGFP-NICD。

5.一种提高真核细胞抗CVB感染的方法，是活化Notch信号通路，使CVB病毒感染真核细胞的进程及感染量得到减弱。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述活化Notch信号通路的方法为：向真核细胞中转染Notch蛋白胞内区基因（NICD），使Notch信号通路得到活化；具体是将所述NICD基因导入质粒中得到携带所述NICD基因的重组DNA质粒，再将该重组DNA质粒转染真核细胞。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：以pEGFP-N3为出发质粒构建所述携带NICD基因的重组DNA质粒（命名为pEGFP/NICD）。

8.根据权利要求5或6或7所述的方法，其特征在于：所述真核细胞为CVB易感细胞，优选上皮细胞，实验选择HeLa细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述重组DNA质粒转染细胞的方法为：待HeLa细胞贴壁并且汇合度达到70％-80％后，转染重组DNA质粒pEGFP/NICD。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：以6孔板为例，所述重组DNA质粒转染细胞的操作为：（1）每孔取4μg的重组DNA，用250μL无血清培养基进行稀释；（2）每孔取10μL脂质体Lipofectamine^TM 2000，加入250μL无血清培养基中缓慢混匀，室温静置5min；（3）将步骤（1）与（2）中的溶液缓慢混匀，室温静置20min，得到转染复合物；（4）将步骤（3）中的溶液加入到铺种HeLa细胞的细胞板孔中，约500μL/孔，补加1.5mL无血清培养基至2mL/孔，轻柔晃动细胞板使转染复合物均匀分布在培养板中，置于37℃、5％CO₂恒温孵箱培养；（5）4-6h后将细胞板孔中的转染复合物与无血清培养基吸出，更换为含10％FBS的DMEM培养液，37℃、5％CO₂恒温孵箱继续培养，一般培养24h后，荧光显微镜下观察可见发绿色荧光的细胞，这些细胞就是转染有携带Notch蛋白胞内区基因（NICD）的重组DNA pEGFP/NICD的HeLa细胞，命名为HeLa-pEGFP-NICD。