[发明专利]一种酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及发酵生产抗生素提取技术领域，具体涉及一种酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素的提取方法，是一种用酸碱法提取酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素的新方法。

背景技术

乙酰异戊酰泰乐菌素是一种新型高效的大环内酯类抗生素，是一种动物专用抗生素药物，目前在国内外被广泛使用。目前乙酰异戊酰泰乐菌素原料药的工业化生产是基于微生物发酵的方式通过对泰乐菌素进行生物转化生成乙酰异戊酰泰乐菌素。

早在上世纪70年代末，Okamoto等就发现链霉菌能对泰乐菌素的3-OH和4”-OH位置进行选择性酰化修饰而转化为乙酰异戊酰泰乐菌素。链霉菌具有的酰化功能是通过三个基因表达产生的胞内酶acyA和acyB1-B2提供的，其中acyA主要负责乙酰基化功能，而acyB1-B2负责异戊酰化功能，acyB2基因是acyBl基因的正调控基因。反应分两步，第一步反应是泰乐菌素经胞内酶acyA转化为乙酰泰乐菌素；第二步反应是由另一个胞内酶acyB1-B2把乙酰泰乐菌素转化为乙酰异戊酰泰乐菌素。

将链霉菌在含淀粉、酵母粉、大豆粉、酵母膏和无机盐的液体培养基中通气培养，待菌体生长到一定阶段后在培养液中持续添加一定浓度泰乐菌素水溶液，持续培养，泰乐菌素在链霉菌产生的胞内酶作用下转化为乙酰异戊酰泰乐菌素，100-150小时后即得到含有乙酰异戊酰泰乐菌素的发酵液。将发酵液经过提取纯化的制备过程，即可得到高纯度的酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素。同样，不仅仅是发酵液，其他低含量的乙酰异戊酰泰乐菌素样品经过提取纯化的制备过程也可得到高纯度的酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素。

在发酵工业中，从发酵液中提取出目标产物，再经过后处理纯化而得到成品的过程是生产中的重要一环。在乙酰异戊酰泰乐菌素工业生产中，传统的提取工艺采用的是有机溶剂萃取法。有机溶剂萃取法要使用有机溶剂如醇类、酮类等，由于这些有机类溶剂往往具有强挥发性、易燃易爆和价格不菲等特点，且在生产过程中涉及到溶剂的贮存、回收等问题，生产消耗和设备投入很大，存在生产成本高、环境污染严重和安全隐患等缺点。

发明内容

针对传统的有机溶剂萃取法中存在的不足，本发明的目的在于保证成品的高收率和高纯度的同时，提供一种较传统提取工艺更安全、成本更低、对环境污染少的酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素提取方法。

本发明方法的技术构思如下：调节含乙酰异戊酰泰乐菌素的发酵液或含乙酰异戊酰泰乐菌素的水体的pH值，使乙酰异戊酰泰乐菌素充分溶解于水中，再经过固液分离，得到澄清的乙酰异戊酰泰乐菌素水溶液。在乙酰异戊酰泰乐菌素水溶液中加入氢氧化钠或氢氧化钾，调节水溶液pH值，使乙酰异戊酰泰乐菌素从水溶液中析出，经固液分离，得到乙酰异戊酰泰乐菌素固态粗提物，粗提物与酒石酸再在水溶液中成盐，再经过过滤、干燥获得酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素精品。

为了实现上述目的，本发明采取了如下技术措施：

一种酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素的提取方法，其步骤如下：

（1）用硫酸调节含乙酰异戊酰泰乐菌素的发酵液或水体pH值至3.0-5.5，使乙酰异戊酰泰乐菌素充分溶解于水中，再进行固液分离，得到澄清的乙酰异戊酰泰乐菌素水溶液；

（2）在澄清的乙酰异戊酰泰乐菌素水溶液中加入氢氧化钠或氢氧化钾溶液，调节pH值至6-9.5，然后升温至80℃（此时乙酰异戊酰泰乐菌素会从水溶液中析出），得悬浊液；

（3）将悬浊液进行固液分离，得到乙酰异戊酰泰乐菌素固态粗提物；

（4）将乙酰异戊酰泰乐菌素粗提物和酒石酸以2：1-2：1.2的摩尔比在pH值2.5-4.5的条件下充分溶解于水中，溶解过程中用硫酸调节pH值，制成5-15m/v%（g/100mL）的酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素水溶液，然后进行固液分离，得到澄清的二次水溶液；

（5）将澄清的二次水溶液干燥处理除去水分得到酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素精制品。

本发明以水作为溶媒，通过调节乙酰异戊酰泰乐菌素发酵液或水溶液的pH值，使乙酰异戊酰泰乐菌素从发酵液或含水液体中充分溶解后再析出，通过固液分离来纯化提取。粗提取物收率大于97%；与酒石酸成盐之后经过滤、干燥获得酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素，纯度大于90%，收率大于94%。因此，用本发明工艺提取酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素收率高、成本低、更安全、少污染。

具体实施方式

下面申请人将结合具体的实施例对本发明的方法加以详细说明，以便本领域的技术人员对本发明有更进一步的理解，但以下实施例不以任何方式解释为对本发明保护范围的限制。