[发明专利]一种从蚯蚓血清中纯化乙酰胆碱酯酶的方法

权利要求书

1.一种从蚯蚓血清中纯化乙酰胆碱酯酶的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）蚯蚓预处理：将蚯蚓放置清水中24h，排除体内的粪便，将其储存在4℃冰箱中待用；

2）蚯蚓血清的粗提取：以磷酸缓冲液(pH8.0，0.1mol/L)为制备粗提取液的溶液，按照匀浆液比为1:1[蚯蚓质量(g)/磷酸缓冲液体积(mL)]制成的匀浆液，在4℃下离心(10000r/min)20min得粗酶提取液；

3）浊点萃取过程：取用10mL的离心管，而后加入100μL粗酶提取液，再加入表面活性剂Triton X-114(0.09%,w/v)溶液和0.6mL pH4.1柠檬酸缓冲溶液用二次水定容到10mL充分振荡并摇匀；

4）将第3）步得到的溶液放置在水浴温度为35℃恒温水槽中平衡9分钟，而后将其取出，在4000r/min的离心机中离心5分钟，分层后将其上层溶液倾倒，下层即为纯化后乙酰胆碱酯酶。