[发明专利]草地早熟禾脂肪酸含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及脂肪酸的含量测定方法，具体地，涉及草地早熟禾脂肪酸含量测定方法。 

背景技术

目前测定植物脂肪酸含量的方法技术多集中在油料作物，以及植物组织中的种子部分。关于植物叶片组织的脂肪酸含量的测定方法国外有拟南芥、菠菜等叶片组织脂肪酸含量的测定方法比较成熟。这些方法概况起来分为油脂提取、皂化和甲酯化三个主要步骤，所需试剂种类多，步骤繁复，花费时间长。 

草地早熟禾(Poa Pretensis)属于多年生草本植物，须根系，具有根状茎，叶色青绿，观赏效果好，根茎繁殖，再生力强，耐修剪，抗寒能力强，耐旱性稍差，耐践踏，是非常重要的草坪草和牧草草种。在北方及中部地区，南方部分冷凉地区广泛用于公园、机关、学校、居住区、运动场等地绿化。其特性是喜冷凉湿润的气候，在我国北方部分地区，可保持较长的绿期，可在一定程度上满足园林四季常青的要求。但草地早熟禾对高温和干旱条件不适应，在北方夏季高温条件下，易感病，故该草种对种植管理要求较高，需要较高的水分、养分等投入。 

草地早熟禾的耐旱性和其不饱和脂肪酸含量相关，科研工作者可通过不饱和脂肪酸含量的比较结果，不饱和脂肪酸含量较高的品种耐旱性也较好。可以通过选育、培育耐旱品种，以满足高温、干燥地区园林绿化的需要。因此，能够简易快速准确地测定草地早熟禾各脂肪酸的含量成为一个亟待解决的问题。 

关于草地早熟禾叶片组织脂肪酸含量的测定方法，在现有技术 中是一个空白。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种草地早熟禾脂肪酸含量测定方法。 

本发明提供的草地早熟禾脂肪酸含量测定方法，包括以下步骤： 

(1)取草地早熟禾新鲜叶片组织于玻璃瓶中； 

(2)加入含十七烷酸的硫酸； 

(3)排空玻璃瓶内空气、密封，水浴或金属浴； 

(4)冷却，加入氯化钠溶液和正己烷，充分摇匀，离心； 

(5)取离心后的上层油相，入GC-MS仪器分析，根据样品峰图计算脂肪酸的含量。 

其中，步骤1)所述的叶片组织为0.2±0.02g全部展开的叶片组织，将其处理为小于1cm的叶段置于玻璃瓶中。 

其中，步骤2)所述的硫酸浓度为1N(0.5mol/L)，硫酸与十七烷酸的体积质量比为1mL:0.1mg；加入硫酸与叶片组织的体积质量比为1mL:0.2g。 

本发明的0.5mol/L硫酸是用甲醇稀释浓硫酸获得的。 

其中，步骤3)所述水浴或金属浴的温度为60~80℃，时间为90~120min。 

优选地，步骤3)所述水浴或金属浴的温度为80℃，时间为90min。 

其中，步骤4)所述的冷却温度为-20～-10℃，冷却5~15min。 

优选地，冷却温度为-20℃，冷却时间10min。 

其中，步骤4)所述氯化钠溶液浓度为0.9%，其加入量与叶片组织的体积质量比为1.5mL:0.2g。 

其中，步骤4)所述正己烷加入量与加入硫酸体积比例为1mL：0.2mL。 

其中，步骤4)所述离心为1500~3000rpm，2-5min。 

其中，步骤5)取1~3μL上层油相，入GC-MS仪器分析。 

优选地，步骤5)取1μL上层油相，入GC-MS仪器分析。 

在本发明的一个实施例中，使用气相色谱-质谱仪HP GG-MS(HP 6890GC和HP 5973MS)，采用60-mHP-5MS毛细管柱子，内直径0.25mm，气相色谱仪的程序参数设置如下：170℃10min，上升到220℃10min，气相流速1mL min^–1。用注射器注入1μL上层油相之后，启动程序。1个样品的脂类分析持续时间大约为40min。 

通过气相质谱联仪分析，与标准质谱数据库对比分析确定甲酯化脂肪酸的名称，并得到每个样品的峰图。采用内参法，即十七烷酸17:0的重量和质谱分析图上的峰面积计算其他脂肪酸的含量百分比。 

草地早熟禾主要脂肪酸种类如下： 

16:0棕榈酸，饱和脂肪酸； 

16:1棕榈油酸，不饱和脂肪酸； 

18:0硬脂酸，饱和脂肪酸； 

18:2亚油酸，不饱和脂肪酸； 

18:3亚麻酸，不饱和脂肪酸。 

(注：分号前边数字代表脂肪酸碳链的长度，即碳原子的个数，分号后边代表碳链双键的个数)