[发明专利]一种缺氧培养盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明属于医学技术领域，涉及一种医学实验设备及其使用方法，具体涉及一种缺氧培养盒及其使用方法。

背景技术

组织缺氧是临床常见的病理现象，是多种疾病中导致细胞损伤的常见因素。为研究体外培养的细胞对无氧条件的反应，各国科学家采取多种方式建立细胞无氧培养条件，典型的几种缺氧模型如下：有研究者向常规培养箱中充入氮气替换氧气，并检测培养箱中氧气浓度；有研究者在密闭容器中放入细胞，进行真空抽吸后，充入95％N₂+5％CO₂。

现有技术中的以上设计存在以下几点缺点：1、氮气替换氧气不充分，需要较长时间才能达到无氧要求，另外开关细胞培养箱又需较长时间达到无氧条件，且所需时间不能把握，不易准确计算缺氧时间；2、在密闭容器抽真空，容器内负压可对细胞造成损伤，影响实验结果；3、所需设备昂贵，设计复杂不易操作。

简单快速地建立培养细胞的无氧条件有助于实验室准确研究细胞对无氧的病理生理反应及其分子机制，而现存的条件无法满足这一要求。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种缺氧培养盒及其使用方法，本发明的缺氧培养盒能够快速达到缺氧条件，并能长时间满足无氧条件，且本发明简单易于操作，造价低，可大量生产，可重复使用，可消毒。

具体技术方案为：

一种缺氧培养盒，包括密封盒盖1、盒体2和碱性焦性没食子酸溶液袋3，其特征是：密封盒盖1内侧设有压力缓冲气囊12，气囊通过通气阀门11与外界相通，盒体2底部设有培养器皿支架25，盒体2壁上设有加液阀门23、加取培养基阀门及通道24、加液盘肠25，碱性焦性没食子酸溶液袋3内溶液通过输液器输32及加液阀门23加入到缺氧培养盒内。

在密封盒盖1内侧设有压力缓冲气囊12通过气囊通气阀门11与外界相通，来平衡缺氧培养盒与外界的压力，且，所述压力缓冲囊12可拆卸。

所述加液盘肠25开有喷洒液小孔。

所述盒体2壁上设有加取培养液阀门及通道24。

碱性焦性没食子酸溶液袋3是真空密封袋或医疗用弃的250ml输液袋，经蒸馏水冲洗后用注射器抽成真空。其使用方法特征是：先将18.87g焦性没食子酸溶于水中配成100ml溶液，用注射器加入到真空密封袋中，再将17.96g氢氧化钠溶于水中，配成50ml溶液，用注射器加入到真空密封袋中，混匀，置于25℃水浴缸中，预热后使用。

一种缺氧培养盒的使用方法，包括以下步骤：在加碱性焦性没食子酸溶液去除盒内氧气后，并用注射器通过加液阀门23向缺氧盒内加入柠檬酸溶液，使柠檬酸、氢氧化钠和焦性没食子酸构成缓冲液。其配比特征是：如果实验设计不需加二氧化碳，可不加柠檬酸；如果实验需清除过多二氧化碳蓄积，可加柠檬酸24g溶于50ml水中配成的溶液；如实验不需清除蓄积的二氧化碳，可加柠檬酸28g溶液50ml水中配成的溶液。

在加柠檬酸溶液后，如果发明设计所用氢氧化钠为分析纯，含有碳酸钠1.5％，则不需加入二氧化碳，所生成的二氧化碳已能满足细胞培养所需；如果所用氢氧化钠纯度较高，则需进一步加入二氧化碳气体60ml。

缺氧培养盒工作原理：碱性焦性没食子酸能快速与氧发生反应，吸收空气中的氧气，达到清除培养盒内氧气的作用，而不与培养基接触。

3NaOH+C₆H₃(OH)₃→C₆H₃(ONa)₃+H₂O

4C₆H₃(ONa)₃+O₂→2(KO)₃C₆H₂-H₂C₆(OK)₃+2H₂O