[发明专利]一种蛋白A吸附介质

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术及抗体吸附技术领域，涉及一种蛋白A吸附介质。

背景技术

蛋白A来源于金黄色葡萄球菌的细胞壁，全称为金黄色葡萄球菌蛋白A，简称蛋白A或SPA。天然蛋白A的基因编码序列由1464个碱基组成，共编码488个氨基酸，分子量约42kd，包含E、D、A、B、C和X（从氨基端至羧基端）共六个结构域。众所周知，由于蛋白A能选择性吸附人或哺乳动物的抗体（主要为IgG、也包括部分的IgA和IgM），因而被广泛应用于抗体纯化、医学诊断及临床治疗等多个领域。

在临床治疗方面，以蛋白A为配体的蛋白A吸附介质被用于治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病，以及用于降低肾移植患者的抗体水平等，并取得了较好的疗效。目前在国外市场上应用的蛋白A免疫吸附柱产品（将蛋白A吸附介质填装于柱体中制成）主要有Prosorba和Immunosorba两种，均为Fresenius Medical Care公司生产。由于蛋白A免疫吸附柱在临床治疗过程中属于体内应用（属于三类医疗器械），对人体具有潜在危险，因而必须对其安全性、有效性进行严格控制。但由于蛋白A吸附介质在热压灭菌后会部分或完全失去抗体吸附性能，目前的蛋白A免疫吸附柱产品均未进行最终灭菌，这无疑增加了产品的安全性风险，并导致必须对产品生产过程进行更为严格的控制（即无菌生产工艺），使工艺流程更为复杂。事实上，目前尚未有能够耐受热压灭菌的蛋白A吸附介质的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可耐受热压灭菌的蛋白A吸附介质，以解决蛋白A免疫吸附柱产品不能进行产品最终灭菌的问题。

本发明所述的蛋白A吸附介质是一种可耐受121.5℃、20分钟热压灭菌的蛋白A吸附介质，它是由固相载体材料和通过化学偶联固定在载体上的配体构成，所述配体是具有如序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的重组蛋白A，并且由以下步骤制备：

a、将固相载体材料按质量比1：1.5与0.2M高碘酸钠溶液混匀，15-25℃振摇反应4小时，用水洗涤干净，抽干得到填料；

b、于步骤a所得的填料中加入含具有如序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的重组蛋白A的硼酸盐缓冲液，使每克填料对应的重组蛋白A质量不低于10mg，15-25℃振摇反应8小时，用水洗涤干净，抽干得到合成填料；

c、于步骤b所得的合成填料中按质量比1：1.5加入含1%硼氢化钠的PBS溶液，15-25℃振摇反应4小时，用水洗涤干净后即得。

根据本发明所述蛋白A吸附介质的进一步特征，所述固相载体材料是琼脂糖凝胶微球。

附图说明

图1是重组蛋白A制备过程中各样品的SDS-PAGE电泳图，泳道1是超声破碎细胞并离心后获得的沉淀；泳道2是超声破碎细胞并离心后获得的上清；泳道3是低分子量蛋白标准，自上而下依次为97kd、66kd、44kd、29kd、20kd和14kd；泳道4为钴离子螯合亲和层析纯化的穿流峰；泳道5为最终获得的重组蛋白A；泳道6和7为钴离子螯合亲和层析纯化的洗脱液；泳道8为经诱导表达后的细菌总蛋白。

图2是编号为①的蛋白A吸附介质在热压灭菌前后的血浆吸附试验的洗脱液的SDS-PAGE电泳图，泳道1是热压灭菌前的吸附介质的洗脱液；泳道2、3、4分别是热压灭菌后的吸附介质在循环1、2、3的洗脱液；泳道5是低分子量蛋白标准，自上而下依次为97kd、66kd、44kd、29kd、20kd和14kd。

图3是编号①~④的蛋白A吸附介质在热压灭菌前后的抗体吸附量。

具体实施方式

以下通过实施例结合附图对本发明作进一步的详细说明，这并不限制本发明的保护范围。

一、重组蛋白A的制备

通过以下方法获得重组蛋白A的基因编码序列：

1、直接合成全序列（SEQ ID NO.2）；