[发明专利]一个海带雌配子体特异性分子标记FSML-1488的染色体定位有效
| 申请号： | 201210146700.2 | 申请日： | 2012-05-14 |
| 公开（公告）号： | CN102660648A | 公开（公告）日： | 2012-09-12 |
| 发明（设计）人： | 周志刚;刘宇;谷俊刚;毕燕会 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 金重庆 |
| 地址： | 201306 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一个 海带 配子体 特异性 分子 标记 fsml 1488 染色体 定位 | ||
1.一个海带雌配子体特异性分子标记FSML-1488的染色体定位方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）带有目标片段FSML-1488质粒DNA的制备：通过CTAB法提取海带配子体DNA后，利用PCR技术扩增到长为1488 bp的雌配子体特异性FSML-1488的片段，然后TA克隆后转化至大肠杆菌中，最后提取质粒获得目标片段质粒DNA，所述的目标片段FSML-1488的序列为SEQ ID NO.5；
（2）海带配子体染色体的制备：利用混合酶液，即纤维素酶、果胶酶、离析酶及鲍鱼酶，处理海带配子体细胞，以DAPI染色，获得分裂相比较好的高质量染色体；
（3）探针的制备：对提取的质粒获得目标片段FSML-1488质粒DNA利用切口平法进行绿色生物素标记探针；
（4）荧光原位杂交：按照荧光原位杂交的常规方法进行雌配子体特异性FSML-1488分子标记的染色体定位。
2.根据权利要求1所述的FSML-1488的染色体定位方法，其特征在于，所述的步骤（2）中的混合酶液为纤维素酶、果胶酶、离析酶和鲍鱼酶的混合酶液，其中纤维素酶、果胶酶、离析酶和鲍鱼酶的比例为2:1:1:1.5，混合酶液的浓度为10 mg/mL。
3.根据权利要求1所述的FSML-1488的染色体定位方法，其特征在于，所述的用于扩增海带雌配子体基因组DNA的引物对的序列：正向引物SEQ ID NO.3和反向引物SEQ ID NO.4。
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