[发明专利]一种含ghrelin的羊胚胎体外培养液及其培养方法

权利要求书

1.一种含ghrelin的羊胚胎体外培养液，其特征在于所述羊胚胎体外培养液以TCM199培养液为基质，所述基质中还含有400～800ng/mL的ghrelin、0.15mg/mL的谷氨酰胺、100IU/mL的青霉素、100μg/mL的链霉素和5～10mg/mL的牛血清白蛋白。

2.如权利要求1所述的羊胚胎体外培养液，其特征在于所述羊胚胎体外培养液每1000mL组成如下：ghrelin 400～800mg，谷氨酰胺 150mg，青霉素100000IU，链霉素100000μg，血清白蛋白5～10g，TCM199培养液补足至1000mL。

3.如权利要求1或2所述的羊胚胎体外培养液，其特征在于所述羊胚胎体外培养液中，ghrelin含量为500～600ng/mL，牛血清白蛋白含量为8mg/mL。

4.应用如权利要求1或2所述羊胚胎体外培养液对羊胚胎进行体外培养的方法，所述方法是将受精后的早期羊胚胎用TCM199培养液反复冲洗后，放入所述含ghrelin的羊胚胎体外培养液中，于38～39℃、5% CO₂的环境内，进行胚胎体外培养。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述早期羊胚胎由羊卵母细胞经体外成熟培养、体外受精获得。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述羊卵母细胞体外成熟培养方法如下：从屠宰场获取的卵巢中用注射器抽取的羊卵母细胞，用成熟培养液在38～39℃、5% CO₂的环境内培养20～24小时，获得成熟的羊卵母细胞；所述成熟培养液以常规培养液为基质，所述基质中还含有10 μg/mL的FSH、10 μg/mL的LH、100IU/mL的青霉素、100μg/mL的链霉素和体积百分含量为8%～20%血清，所述常规培养液为TCM199、DMEM、F12、MEM培养液中的一种或两种以上的混合物；所述的血清为小牛血清、胎牛血清或者新生牛血清中一种。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述羊卵母细胞体外受精方法如下：将成熟的羊卵母细胞与精子一同放入受精培养液中，在38～39℃、5% CO₂的环境内培养18～24小时，进行受精，获得早期羊胚胎；所述受精培养液为含2%羊血清的TCM199培养液。