[发明专利]鲍曼不动杆菌多重降落PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及鲍曼不动杆菌感染的分子诊断技术领域，具体涉及多重降落PCR检测方法在下呼吸道标本中鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）检测中的应用。

背景技术

鲍曼不动杆菌为重要的院内感染病原，广泛存在于自然界中，生命力顽强。在医院环境中，鲍曼不动杆菌广泛存在于各种医疗器械与患者的被褥中，亦可于医护人员的手、工作服、听诊器中检出。近年来其在院内感染中的重要性不断上升，主要累及危重患者（如IUC患者），可引起呼吸道感染、脓毒血症与泌尿系统感染等，是医院获得性肺炎（HAP）、尤其是呼吸机相关肺炎（VAP）的重要致病菌。

Neil Woodford等（Woodford N,et al.Multiplex PCR for genes encoding prevalent OXAcarbapenemases in Acinetobacter spp.Int J Antimicrob Agents,2006,27(4):351353.）以bla_OXA-51-like基因为靶标建立的PCR的检测结果支持bla_OXA-51-like基因为鲍曼不动杆菌所固有。然而Lee Y T等发现1株不动杆菌基因型13TU 临床分离株亦存在bla_OXA-51-like基因（Lee Y T,et al.First identification of bla_OXA-51-like in non-baumannii Acinetobacter spp.J Chemother,2009,21(5):514520.）。同时针对鲍曼不动杆菌的多个基因进行检测可提高检测方法的特异性。Korbie,D.J.等（Korbie,D.J.and J.S.Mattick,Touchdown PCR.for increased specificity and sensitivity in PCR amplification.Nat.Protocols,2008.3(9):p.1452-1456.）发现降落PCR可提高PCR的特异性与灵敏度。当前尚无同时针对鲍曼不动杆菌gltA、gyrB、bla_OXA-51-like基因以检测鲍曼不动杆菌的多重PCR报道。本发明建立的多重降落PCR可直接检测下呼吸道标本中的鲍曼不动杆菌，费时少，具高度特异性与灵敏性，有利于鲍曼不动杆菌感染的快速诊断与流行病学调查。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种可快速特异检测下呼吸道标本中鲍曼不动杆菌的多重PCR检测试剂盒及检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明是通过以下技术发案实现的：

一种鲍曼不动杆菌多重降落PCR检测试剂盒，包括：10×PCR缓冲液，MgCl₂，dNTP，TaqDNA聚合酶，BSA，鲍曼不动杆菌阳性对照DNA，3对鲍曼不动杆菌引物；

所述3对鲍曼不动杆菌引物序列如下：

第1对：5’-AGCGACTCAAGCAGACTACC-3’（SEQ ID NO.1）与5’-GAGCAGAGATACCAGCAGAGAT-3’（SEQID NO.2）；

第2对：5’-TTATTATGACCGATGCCGATGT-3’（SEQ ID NO.3）与5’-CAGAATGTGCTGCCATACCT-3’（SEQID NO.4）；

第3对：5’-TAATGCTTTGATCGGCCTTG-3’（SEQ ID NO.5）与5’-TGGATTGCACTTCATCTTGG-3’（SEQID NO.6）（Woodford N,et al.Multiplex PCR for genes encoding prevalent OXA carbapenemases in Acinetobacter spp.Int J Antimicrob Agents,2006,27(4):351353.）；

本发明还公开了应用上述试剂盒的检测方法：

（一）提取待检样本DNA

（二）多重降落PCR法扩增检测待检样本DNA中的gltA、gyrB、bla_OXA-51-like基因，具体步骤如下：

3对鲍曼不动杆菌引物为：

AB_gltA-F：5’-AGCGACTCAAGCAGACTACC-3’（SEQ ID NO.1）