[发明专利]蛋白质TERF1在制备诊断胃癌的试剂中的应用及诊断试剂盒

权利要求书

1.蛋白质TERF1在制备诊断胃癌的试剂中的应用。

2.一种制备诊断胃癌疾病的诊断试剂盒，其特征在于，该试剂盒采用现在临床广泛使用的ELISA技术，应用间接法定性检测人血清中抗蛋白质TERF1的IgG抗体；具体是：用纯化的人蛋白质TERF1抗原通过包被缓冲液稀释后包被在酶标板上的微孔内制成固相抗原，加入封闭液；将标准品与待测血清样品用样品稀释液稀释后加入各自的抗原测定孔中，每孔加入含有辣根过氧化物酶（HRP）标记的anti-Human IgG抗体的酶标试剂，形成TERF1-抗体-酶标二抗复合物，经洗涤液彻底洗涤后加酶底物溶液显色, 酶底物溶液反应时间到后加入酸性终止液；所述酶底物溶液在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色，利用颜色的深浅来检测样品中抗蛋白质TERF1的IgG抗体的水平。

3.根据权利要求1所述的制备诊断胃癌疾病的诊断试剂盒，其特征在于，所述纯化的人蛋白质TERF1是从酿酒酵母中过量表达，亲和纯化而得到，浓度为25μg/mL。

4.根据权利要求1所述的制备诊断胃癌疾病的诊断试剂盒，其特征在于，所述标准品包括0 U/mL标准血清1和100 U/mL标准血清2，分别为正常人血清以及TERF1抗体为阳性的血清稀释于样品稀释液中。

5.根据权利要求1所述的制备诊断胃癌疾病的诊断试剂盒，其特征在于，所述酶底物溶液包括：显色剂A：500 mL溶液中含醋酸钠13.6 g，柠檬酸1.6 g，30 %双氧水0.3 mL、显色剂B：500 mL溶液中含TMB 350 mg，DMSO 20 mL，柠檬酸·H₂O 5.1 g。

6.根据权利要求1所述的制备诊断胃癌疾病的诊断试剂盒，其特征在于，所述包被缓冲液为0.05 M pH 9.6 的碳酸盐缓冲液，即1升溶液中含1.59 g Na₂CO₃，2.93 g NaHCO₃。

7.根据权利要求1所述的制备诊断胃癌疾病的诊断试剂盒，其特征在于，所述封闭液为0.5 % BSA 的0.01 mol/L pH 7.4磷酸盐- NaCl缓冲液（PBS）溶液，即1升溶液中含5 g牛血清白蛋白（BSA），8 g NaCl，0.2 g KH₂PO₄，2.9 g Na₂HPO₄·12H₂0，0.2 g KCl。

8.根据权利要求1所述的制备诊断胃癌疾病的诊断试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液为0.01mol/L pH 7.4磷酸盐- NaCl缓冲液（PBS）。

9.根据权利要求1所述的制备诊断胃癌疾病的诊断试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为0.01 mol/L pH 7.4磷酸盐-NaCl缓冲液(PBST)，PBST内含0.05 % Tween-20，即1升溶液中含8 g NaCl，0.2 g KH₂PO₄，2.9 g Na₂HPO₄·12H₂0，0.2 g KCl，0.5 mL Tween-20。

10.根据权利要求1所述的制备诊断胃癌疾病的诊断试剂盒，其特征在于，所述终止液为2 mol/L H₂SO₄溶液。

11.根据权利要求2至10中任一所述的制备诊断胃癌疾病的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的试剂均可以加入防腐剂，以便于保存。