[发明专利]猪HOXA10基因片段作为猪产仔数性状的遗传标记及应用

说明书

技术领域

本发明涉及猪遗传标记制备技术领域，具体涉及一种猪HOXA10基因第一外显子SNP作为猪产仔数性状相关的遗标记及应用，它包括猪HOXA10基因第一外显子序列突变位点的检测方法与应用。 

背景技术

猪的产仔数是繁殖性状中重要的经济性状,直接关系到养猪业的经济收益。在英国，如果每头母猪的产活仔数每胎提高l头,英国的养猪业每年就可增加利润7亿英镑,整个欧盟养猪业可多获利20亿英磅；在我国,如果母猪产仔数每胎提高1头,每年也将增收190亿人民币的纯利（王莉兴等,2008）。母猪产仔数性状是一个由排卵、受精、着床、胎儿发育等多个具有时间顺序特征的组分性状构成的复合性状。从目前的研究情况来看，猪早期胚胎丢失率和中期胎儿死亡率是决定母猪产仔数的主要原因之一。母猪早期胚胎丢失与子宫内环境密切相关，而胚泡异常发育与着床失败是导致母猪早期胚胎丢失的主要原因。 

HOXA10基因是同源异型基因的一种，在进化上高度保守，其表达产物是一种转录因子。目前，在人及其他哺乳动物中的研究表明，HOXA10基因是调控子宫微环境、影响子宫内膜容受性和胚胎着床的关键因子，该基因在子宫内膜上皮细胞中持续上调是正常妊娠的必要条件。HOXA10基因在“着床窗口期”高表达，雌激素和孕酮分别通过它们的受体直接调控该基因的表达（Taylor HS et al.,1998;Daftary and Taylor,2006;Godbole et al.,2007），与其辅因子PBX2及Meisl相互作用形成不同的异源二聚体或三聚体（Sanro JL，2005），调控β3（Daftary GS et al.,2002）、EMX2（Troy PJ et al.,2003）、IGFBP-1（Kim et al.,2003)、EP3、EP4（Svingen T andTonissen KF,2006）等下游基因，参与雌性生殖系统的发育和正常子宫内膜形态的构建，并对子宫内膜的增殖与分化、子宫内膜容受性的建立、胚胎的定位及粘附、胞饮突的形成、子宫内膜的蜕膜化以及血管通透性的增强发挥着重要作用。在猪中的研究表明，妊娠14d母猪连续注射雌二醇戊酸盐处理后，子宫内膜中HOXA10基因表达量显著高于未处理的对照组，但低于正常妊娠12d的母猪子宫内膜，差异不显著（Chen et al.,2010）。猪在妊娠第12d和15d猪子宫内膜中HOXA10基因的表达量显著高于妊娠第10d和11d（Blitek et al.,2010）。取发情期第9d的猪子宫内膜细胞，进行体外培养，并加入雌激素（1-100nM）和孕激素（10-1000nM）后，HOXA10基因和PGHS-2（前列腺素合成基因）基因的表达量上升，表明HOXA10基因在母猪发情周期的分泌中期子宫内膜中的表达受到雌激素和孕激素的调控（Blitek et al.,2010）。猪妊娠第15d的子宫内膜中HOXA10基因的表达量显著高于发情周期15d的子宫内膜，并且体外培养实验表明，雌激素和孕激素可以上调子宫内膜间质细胞的HOXA10基因的表达（Blitek et al.,2011）。另外，阻碍成体母鼠子宫内膜中HOXA10基因的表达导致胚胎附植和窝产仔数降低（Akbas GE et al.,2004）。鉴于HOXA10基因在物种间的高度保守性，因此推测HOXA10基因的表达可能与猪的产仔数性状相关。 

目前与猪重要经济性状有关的分子标记进行了一定的研究，但其遗传效应还不明确，能真正应用于育种生产的分子标记更是屈指可数。也没有深入到调控基因表达和基因遗传效应产生的根本原因。而关于猪的HOXA10基因的研究非常少，迄今为止，尚未将该基因作为猪产仔数性状的分子标记。因此，本研究分析了猪HOXA10基因的结构及多态性，成功分离出了猪HOXA10基因第1外显子的序列，建立了第1外显子突变体的检测方法，并分析了其多态性与产仔数之间的相关性，为产仔数性状改良提供新的标记。 

发明内容

本发明的目的在于获得一种与猪产仔数性状相关的遗传标记，克隆HOXA10基因第1外显子序列，寻找突变位点以及基因多态性的检测方法，为猪产仔数性状检测提供一种遗传标记和方法。 

本发明的技术方案如下：