[发明专利]DAPK3基因hsa-miR-20a的作用靶位点

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学及医药领域，具体涉及微小RNA（miRNAs）hsa-miR-20a对抑癌基因DAPK3的表达抑制的靶位点（靶分子），本发明还涉及利用该通路解除DAPK3所受到的表达抑制，从而激活其抑制人类癌症细胞生长的方法以及相关药物。 

背景技术

微小RNA(miRNAs)是迄今发现的最重要的一类小RNA。它是由20－25个核苷酸组成的非编码调控RNA，主要在RNA水平上对基因表达进行调控，在细胞增殖和死亡、脂肪代谢、神经元定位、造血细胞系分化和各种发育过程中均起着至关重要的调控作用（Kim,V.N.MicroRNA Biogenesis:Coordinated Cropping and Dicing.Molecular Cell Biology:Nature Reviews.6:376-385;2005，Bartel,D.P.MicroRNAs:genomics,biogenesis,mechanism,and function.Cell 116,281–297;2004.）。目前在人体内所发现的miRNA已有1921个，这些miRNAs的表达谱在正常组织和癌症组织中有着极大的不同，这提示miRNA在癌症的发生、侵染、转移等过程中发挥着重要的作用。 

2005年来，miRNA在癌症发生中起作用已成为生命科学领域的一个热点，美国科学家当年首次将位于人类13号染色体上的mir-17-92cluster（簇）命名为“oncomiR1”（Lin He,J.Michael Thomson,Michael T.Hemann,Eva Hernando-Monge,David Mu,Summer Goodson,Scott Powers,Carlos Cordon-Cardo,Scott W.Lowe,Gregory J.Hannon and Scott M.Hammond.A microRNA polycistron as a potential human oncogene.Nature 435,828-833）。同期发现几乎所有被研究的癌症都有特定的标签miRNA，大部分的标签miRNA水平被上调，也有相当部分的miRNA水平被下调（Stefano Volinia,George A. Calin，Chang-Gong Liu，Stefan Ambs，Amelia Cimmino，Fabio Petrocca，Rosa Visone，Marilena Iorio，Claudia Roldo，Manuela Ferracin，Robyn L.Prueitt，Nozumu Yanaihara，Giovanni Lanza，Aldo Scarpa，Andrea Vecchione，Massimo Negrini，Cunis C.Harris，and Carlo M.Croce.A microRNA expression signature of human solid tumors defines cancer gene targets.Proc Natl Acad Sci.103，2257-2261)。同年后期发现大约50％被注解的miRNAs都定位在基因组上与肿瘤相关的脆性位点。mir-17-92簇包括miR-17，miR-18，miR-19，miR-20a，and miR-92。人类miR-20a是一个原癌基因，在直肠癌、胰腺癌和前列腺癌均呈现高表达。研究表明高表达miR-20a可以大幅降低c-Myc转基因小鼠癌变细胞的凋亡，从而导致癌症发生的高速度和高致死率，提示miR-20a在体内可能起抗凋亡的作用。到目前为止被验证的miR-20a的作用靶标只有E2F1，miR-20a可能通过降低E2F1的蛋白表达而抑制细胞凋亡(Yannick Sylvestre，Vincent De Guire，Emmanuelle Querido，Utpal K.Mukhopadhyay，Véronique Bourdeau， Major，Gerardo Ferbeyre，and Pascal Chartrand．An E2F/miR-20a Autoregulatory Feedback L00p.J.Biol.Chem.282，2135-2143，Kathryn A.O′Donnell，Erik A.Wentzel，Karen I.Zeller，Chi V.Dang，and Joshua T.Mendell.c-Myc-regulated microRNAs modulate E2F1 expression．Nature435，839-843)。但是当在c-Myc转基因小鼠中敲除E2F1后并没有引起细胞凋亡的降低。这说明miR-20a并不是通过降低E2F1蛋白的表达来抑制细胞凋亡的(Troy A.Baudino，Kirsteen H.Maclean，Jennifer Brennan，Evan Parganas¹，Chunying Yang，Aaron Aslanian，Jacqueline A.Lees，Charles J.Sherr，Martine F.Roussel and John L.Cleveland．Myc-Mediated Proliferation and Lymphomagenesis，but Not Apoptosis，Are Compromised byE2f1Loss.Molecular Cell，11，905-914)。到目前为止miR-20a抑制凋亡的作用机制仍然不清楚。