[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的铂（II）配合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，涉及一种铂配合物，这种配合物具有抗肿瘤活性。

背景技术

癌症是一种严重威胁人类健康和生命的疾病，是继心脑血管疾病之后的全球第二大死亡疾病。近年来，由于环境恶化、不良生活习惯及人口老龄化等因素的影响，我国的癌症发病率不断增加。癌症已成为人类亟待攻克的医学难题之一。

在20世纪60年代，美国密执安州立大学教授Rosenberg在研究直流电场对大肠杆菌生长的影响时发现顺铂具有抗癌活性，并通过临床验证，顺铂对多种肿瘤均有良好的治疗效果，从而开辟了金属铂络合物抗癌作用研究的新领域。目前铂类抗癌药物已成为癌症化疗中不可缺少的药物，已有顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、舒铂、洛铂等获批准上市。但目前上市的药物也存在许多自身固有的缺点：毒副作用大，会导致恶心、呕吐、骨髓抑制等，彼此之间存在交叉耐药性及抗癌谱窄等，这些缺点限制了它们更广泛的使用。寻找低毒、高效、广谱及缺乏交叉耐药性成为了铂族药物研究的重要方向。

研究发现，某些天然药物中的有效成分的金属配合物的生物活性明显强于单一的有效成分，以斑蝥酸、槲皮素为离去基团与铂配位的新型抗癌药物相继推出。

没食子酸亦称五倍子酸或棓酸，是一种有机酸，可见于五倍子、漆树、茶等植物中，化学式C₆H₂(OH)₃COOH 。体外对金黄色葡萄球菌、八叠球菌、α－型键球菌、奈瑟氏球菌、绿脓杆菌、弗氏痢疾杆菌、伤寒杆菌Hd、副伤寒杆菌A等有抑制作用,其抑菌浓度为5mg/ml。体外, 在3%的浓度下对17种真菌有抑菌作用, 对流感病毒亦有一定抑制作用。 对吗啉加亚硝钠所致的小鼠肺腺瘤有强抑制作用。本发明根据没食子酸的这个特点，将其与铂配位。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有抗肿瘤活性的铂配合物。

本发明目的所说的铂配合物，以没食子酸根为离去基团，以环戊胺，甲胺为伴随基团，结构如下：

。

本发明的铂配合物中文化学名称为顺式-没食子酸根-环戊胺、甲胺合铂(II)，分子式为Pt(CNH₅)(C₅NH₁₁)(C₇H₄O₅)，分子量为479。

接种细胞：用含10％胎牛血清的培养液（DMEM或者RMPI1640）配成单个细胞悬液，以每孔5000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积100μL，贴壁细胞提前12小时接种培养。加入待测化合物溶液（固定浓度40μmol/L初筛，在该浓度对肿瘤细胞生长抑制在50%附近的化合物设5个浓度进入梯度复筛），每孔终体积200μL，每种处理均设3个复孔。显色：37摄氏度培养48小时后，每孔加MTT溶液20μL。继续孵育4小时，终止培养，吸弃孔内培养上清液，每孔加200μL的SDS溶液（10%），过夜孵育（温度37℃），使结晶物充分融解。比色：选择595nm波长，酶联免疫检测仪（Bio-Rad 680）读取各孔光吸收值，记录结果，以浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，应用两点法（Reed and Muench法）计算化合物的IC50（μm）值。

结果见下表：

从结果可以看出，化合物具有一定的体外肿瘤生长抑制活性，对白血病HL-60，乳腺癌MCF-7的IC₅₀<10μm。

具体实施方式

本发明铂配合物制备：

所用试剂：纯度不小于98%的顺式-二碘-环戊胺，甲胺合铂(II)，市售分析纯硝酸银，市售分析纯一水合没食子酸，市售分析纯无水乙醇。

制备过程：

顺式-二碘-环戊胺、甲胺合铂(II)采用文献（US4533502）报道的方法制备，将顺式-二碘-二环戊胺合铂(II)在高氯酸溶液中反应至黄色固体完全转变为棕色固体为止，将棕色固体在甲胺溶液中反应至完全变为黄色固体为止。

称取5.7g（0.01mmol）顺式-二碘-环戊胺、甲胺合铂(II)加入少量纯化水搅成悬浊液，称取3.4g（0.02mmol）硝酸银用纯化水溶解后加入到环铂悬浊液中，补充纯化水到约100ml在55~60℃反应约3.5h将AgI过滤后得到浅黄色水解溶液。称取1.9g（0.01mmol）没食子酸，用250ml无水乙醇溶液溶解，在避光搅拌的条件下加入到水解溶液中，55℃反应6h。将得到的固体过滤，先后用水、无水乙醇各洗2次后干燥得到2.7g浅黄色固体。元素分析：分子式PtC₁₃H₂₀N₂O₅，C、H、N、Pt的计算值分别C 32.57%，H4.17%, N5.84%, Pt 40.71%; 实际检测值 C 32.52%，H4.05%, N5.79%, Pt 40.64%。主要红外峰及归属：O-H (3429.10cm^-1 st), N-H(3213.00,1586.00cm^-1 st), C-H (2940.00cm^-1 , 2857.23cm^-1  st), C=O (1607.00cm^-1 st) C=O (1390.00cm^-1 δ  ) FAB⁺–MS（m/z）：480（[M+1]⁺, 100%)。¹H-NMR: 1.20~1.25 (m, CH₃ of  aminomethane); 1.40~1.42 (d, CH₂CHHCHHCH₂ of cyclopentane); 1.51~1.52 (d, CH₂CHHCHHCH₂ of cyclopentane); 1.58~1.59 (m,CHHCHCHH of cyclopentane) ; 1.80~1.82 (d, CHHCHCHH of cyclopentane); 2.63~2.64 (d, CH₂CHCH₂ of cyclopentane); 5.01~5.02 (m, NH₂ of aminomethane); 5.11~5.13 (d, NH₂ of cyclopentane); 5.29~5.31 (m, OH of Gallic acid); 7.10~7.12 (m, CHCCH of Gallic acid)。