[发明专利]皮寒药中化学成分的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明提供了皮寒药中化学成分的分离纯化方法。

背景技术

芒柄花素又称刺芒柄花素，芒柄花黄素，生原禅宁B，普拉脑，大豆黄素4′–甲基醚，为黄酮类成分。现代研究表明芒柄花素具有雌激素样作用，抗氧化作用，可明显促进非特异性免疫系统，抗癌细胞作用，还有降血脂，利尿等作用。芒柄花素最初来源于红车轴草、刺芒柄花中，后期逐渐发现该类化合物也可以从黄芪、报春花等其他植物中分离得到。谭日红等，以间苯二酚和对甲氧基苯乙酸为原料，合成得到了芒柄花素（谭日红，等，芒柄花素的分离及合成研究，化学研究与应用，200921卷5期）。芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷是芒柄花素常见的糖苷衍生物之一，多见于黄芪等植物中，任欣意等，通过芒柄花素、1-溴-2，3，4，6-O-四乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖进行缩合反应得到芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷（任欣意，等，芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷的合成研究，天津化工，2006年20卷2期）。

高丽槐素又称马卡因、朝鲜槐英、山槐素，为黄酮类成分。现代研究表明高丽槐素具有抗菌作用，抗肿瘤作用，对cAMP磷酸二酯酶具有抑制作用。目前，高丽槐素仍多是从高丽槐、广豆根等植物中分离得到。

腺苷，即9-β-D-呋喃核糖基腺嘌呤，是一种重要的医药中间体，利用腺苷可制成许多药物如嘌呤霉素、阿糖腺苷等。目前，腺苷的制备多是以化学合成法为主，如由肌苷为起始原料进行腺苷的合成。

7，2′-二羟基-4′-甲基-异黄酮，为异黄酮类化合物，具有一定的生物活性，异黄酮类化合物多可用于心血管疾病的治疗。目前还鲜见7，2′-二羟基-4′-甲基-异黄酮的分离纯化及合成方法。

上述化合物均具有良好的应用前景，为了降低这些化合物的生产成本，减少对现有资源的过度依赖，研究人员也正在寻找更多的原料来源以及制备方法。

皮寒药为四川攀西地区安宁河流域治疗感冒的民间草药，当地百姓又称其为“皮伤寒”、“鸡大腿”，来源于豆科米口袋属植物川滇米口袋Gueldenstaedtia delavayi Franch.的干燥全草，全草入药，四季可采；性寒，味辛苦，清热解毒、镇痛。“皮寒药”一词始见于《西昌中草药》，在该书中称其来源于蝶形花科米口袋属植物康滇米口袋Amblytropsis delavayi(Fr.)C.Y.Wu的全草。康滇米口袋，即为《中国植物志》收载的川滇米口袋Gueldenstaedtia delavayi Franch.。但是，皮寒药与《中药大辞典》及中医院校中药学教材所载的米口袋Gueldenstaedtia multiflora Bgun.不是同一植物。

迄今，国内外对皮寒药的研究报道较少，文献记载也不够详尽。在对皮寒药治疗感冒的研究上，何德昭总结和验证了四川省凉山彝族自治州民间使用“皮寒药”——即康滇米口袋治疗感冒的经验，用皮寒药加陈皮治疗符合感冒诊断和感冒患者72例，观察其临床疗效，结果痊愈46例，占63.89％，显效21例，占29.17％，有效5例，占6.94％（何德昭，凉山州民间草药“皮寒药”加陈皮治疗感冒72例，成都中医药大学学报，2004年27卷3期）。

目前，还未见皮寒药中各化学成分的报道，也未见从皮寒药中分离上述化合物的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供从皮寒药中分离纯化多种化合物的方法。

本发明提供了7，2′-二羟基-4′-甲基-异黄酮的分离纯化方法，它包括如下操作步骤：

（1）取皮寒药，加水提取，水提液浓缩后，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯萃取层，回收溶剂后，得皮寒药乙酸乙酯部位；

（2）取皮寒药乙酸乙酯部位，上硅胶柱，采用梯度洗脱方式，用二氯甲烷-甲醇=1:0V/V洗脱除杂后，再用二氯甲烷-甲醇=20:1V/V洗脱，收集洗脱液48份，每份均为1/4柱体积，即得A1-48号流分；

（3）合并A1-35号流分，浓缩后，上硅胶柱，用石油醚-丙酮=6：1V/V洗脱，收集洗脱液，再经葡聚糖柱层析，甲醇冲洗，共收集洗脱液25份，每份均为1/85柱体积，即得B1-25号流分；

（4）取B3-7号流分，回收溶剂后，以甲醇重结晶，得到7，2′-二羟基-4′-甲基-异黄酮。

进一步地，步骤（2）所述硅胶柱为柱层析硅胶柱，其中，硅胶为200-300目；

步骤（3）所述的硅胶柱为薄层硅胶G柱，葡聚糖柱为Sephadex G-25柱。

更进一步地，步骤（2）所述硅胶柱的径高比为1:7-9，优选为1：8。