[发明专利]制备新伐他汀及中间体的方法

权利要求书

1.用于制备新伐他汀的方法，其包括：

(i)包括以下步骤的方法：

(a)酶促水解洛伐他汀、洛伐他汀酸或洛伐他汀酸盐，产生三醇酸或三醇酸盐；

(b)内酯化和酰化三醇酸，产生4-乙酰基内酯，其中所述酰化包括：通过区域选择性酰化4’-OH，保护内酯环上的4位羟基(4’-OH)；

(c)酶促酰化4-乙酰基内酯的8位羟基(8’-OH)，产生4-乙酰基新伐他汀；和

(d)化学地或是酶促地选择性去除4’位的酰基保护基团，从而产生新伐他汀；

(ii)(i)所述的方法，其中所述步骤(b)中的酰化包括，通过酶促区域选择性酰化4’-OH，保护内酯环上的4位羟基(4’-OH)；

(iii)(i)或(ii)所述的方法，其中所述步骤(c)中的酶促酰化4-乙酰基内酯8位羟基(8’-OH)，酶促地区域选择性酰化第8位，产生4-乙酰基新伐他汀；

(iv)同型二酰基化方法，包括以下步骤：

(a)酶促水解洛伐他汀、洛伐他汀酸或洛伐他汀酸盐，产生三醇酸；

(b)通过内酯化，从三醇酸产生二醇内酯；

(c)通过化学酰化，酰化二醇内酯的内酯环上的第4位(4’-OH)和第8位(8’-OH)，产生4,8-二乙酰基内酯；和

(d)通过酶促水解，选择性去除4’位的酰基，从而产生新伐他汀；

(v)(i)至(iv)中任一项所述的方法，其中至少一个步骤是在单独的反应容器中进行的；

(vi)(i)至(v)中任一项所述的方法，其中至少两个步骤是在单独的反应容器中进行的；

(vii)(i)至(vi)中任一项所述的方法，其中至少一个步骤是用细胞提取物进行的；

(viii)(i)至(vii)中任一项所述的方法，其中至少一个步骤是在全细胞中进行的；

(ix)(i)至(viii)中任一项所述的方法，进一步包括新伐他汀的结晶；

(x)(ix)所述的方法，进一步包括新伐他汀的重结晶；

(xi)(i)至(x)中任一项所述的方法，进一步包括重新内酯化，用以提供具有所需纯度的新伐他汀；

(xii)(i)至(xi)中任一项所述的方法，其中至少一个酶促反应是用水解酶进行的，所述水解酶是由与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5有至少55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列同一性，或序列完全相同(100％)的核酸所编码的，或者是其酶促活性片段；

(xiii)(i)至(xii)中任一项所述的方法，其中至少一个酶促反应是通过水解酶进行的，所述水解酶具有的序列和SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6有至少约50％、51％、52％、53％、54％、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的序列同一性，或序列完全相同(100％)，或者是其酶促活性片段；

(xiv)(i)至(xiii)中任一项所述的方法，其中所述方法包括酶促水解洛伐他汀，产生三醇酸或三醇酸盐，随后通过内酯化三醇酸和酶促酰化内酯环的第4位(4’-OH)，产生4-酰基内酯，之后酶促酰化4-酰基内酯，产生4-乙酰基新伐他汀，然后通过区域选择性酶促水解4-乙酰基新伐他汀，产生新伐他汀。

2.制备4-乙酰基内酯的方法，包括酶促水解洛伐他汀，产生三醇酸或三醇酸盐，随后通过内酯化三醇酸，产生二醇内酯，然后通过区域选择性酰化二醇内酯中内酯环上的第4位(4’-OH)，产生4-乙酰基内酯。