[发明专利]属于埃希氏菌属的产L-苏氨酸细菌以及生产L-苏氨酸的方法

说明书

本申请是申请日为2004年12月03日，申请号为2004800358213（国际申请号为PCT/JP2004/018436），名称为“属于埃希氏菌属的产L-苏氨酸细菌以及生产L-苏氨酸的方法”的发明专利申请的分案申请。 

技术领域

本发明涉及通过发酵生产L-氨基酸的方法，更具体地涉及有助于这种发酵的源自大肠杆菌(Escherichia coli)的基因。所述基因可以用来提高L-氨基酸生产，具体地，例如，用来提高L-苏氨酸的生产。 

背景技术

传统上，L-氨基酸是通过利用获自天然来源的微生物菌株或其突变体的发酵方法进行工业生产的，这些菌株受到修饰以提高L-氨基酸的产量。 

已经报道过许多提高L-氨基酸产量的技术，包括用重组DNA转化微生物(例如参见美国专利号4,278,765)。其它提高产量的技术包括提高涉及氨基酸生物合成的酶的活性和/或使所得的L-氨基酸的反馈抑制的靶酶脱敏(例如参见WO 95/16042或美国专利4,346,170;5,661,012和6,040,160)。 

可用于发酵生产L-苏氨酸的菌株是已知的，其中，某些菌株中涉及L-苏氨酸生物合成的酶的活性提高(美国专利5,175,107;5,661,012;5,705,371;5,939,307;EP0219027)，某些菌株耐受化学药物如L-苏氨酸及其类似物(WO0114525A1，EP301572A2，US 5,376,538)，某些菌株中受产物L-氨基酸或其副产物的反馈抑制的靶酶被脱敏(美国专利5,175,107;5,661,012)，某些菌株中苏氨酸降解酶失活(美国专利5,939,307;6,297,031)。 

已知的产苏氨酸菌株VKPM B-3996(美国专利5,175,107和5,705,371)是目前已知的最好的产苏氨酸菌。该菌株为大肠杆菌(Escherichia coli)，于1987年4月7日保藏于俄罗斯国立工业微生物保藏中心(VKPM)(Dorozhny proezd.1，Moscow 113545，Russian Federation)，保藏号B-3996。为了构建菌株VKPMB-3996，将下述几种突变和质粒导入亲本大肠杆菌K-12(VKPM B-7)。突变 体thrA基因(突变thrA442)编码耐受苏氨酸的反馈抑制的天冬氨酸激酶高丝氨酸脱氢酶Ⅰ。突变体ilvA基因(突变ilvA442)编码活性降低的苏氨酸脱氨酶，其导致异亮氨酸生物合成的速率降低并且导致异亮氨酸饥饿的渗漏(leaky)表型。在包含ilvA442突变的细菌中，thrABC操纵子的转录不被异亮氨酸所抑制，因此对于苏氨酸生产非常有效。tdh基因的失活导致苏氨酸降解被阻止。将蔗糖同化作用的遗传决定子(scrKYABR基因)转移给所述菌株。为了提高控制苏氨酸生物合成的基因的表达，将含有突变体苏氨酸操纵子thrA442BC的质粒pVIC40导入中间菌株TDH6。该菌株发酵期间积聚的L-苏氨酸的量可以高达85g/l。