[发明专利]诊断试剂盒及RNF19在制备胃癌早期诊断试剂中的应用

权利要求书

1.一种诊断试剂盒，用于胃癌早期的诊断，其特征在于，所述诊断试剂盒包括酶标板、人蛋白质RNF19、标准血清、酶标试剂、酶底物溶液、封闭液、样品稀释液、洗涤液和终止液，其中，所述人蛋白质RNF19包被于所述酶标板上。

2.如权利要求1所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述人蛋白质RNF19是从酿酒酵母中过量表达，亲和纯化而得到，浓度为50μg/mL。

3.如权利要求1所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述标准血清包括0U/mL标准血清1和100U/mL标准血清2，所述0U/mL标准血清1为健康人血清稀释于样品稀释液中；所述100U/mL标准血清2为RNF19抗体为阳性的血清稀释于样品稀释液中。

4.如权利要求1所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述酶标试剂含HRP-二抗0.1-1μg/mL。

5.如权利要求1所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述酶底物溶液为TMB溶液，所述TMB溶液包括显色剂A和显色剂B，显色剂A：500mL溶液中含有醋酸钠13.6g、柠檬酸1.6g和30%双氧水0.3mL；显色剂B：500mL溶液中含有TMB 350mg、DMSO 20mL和柠檬酸·H₂O 5.1g。

6.如权利要求1所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述封闭液为0.5%BSA的0.01mol/L pH 7.4磷酸盐-NaCl缓冲液（PBS）溶液，即1升溶液中含5g BSA（牛血清白蛋白）、8g NaCl、0.2g KH₂PO₄、2.9g Na₂HPO₄·12H₂O和0.2g KCl。

7.如权利要求1所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液为0.01mol/L pH 7.4磷酸盐-NaCl缓冲液（PBS）；所述洗涤液为0.01mol/L pH7.4磷酸盐-NaCl缓冲液(PBST)，PBST内含0.05%Tween-20，即1升溶液中含8g NaCl、0.2g KH₂PO₄、2.9g Na₂HPO₄·12H₂O、0.2g KCl和0.5mL Tween-20；所述终止液为2mol/L H₂SO₄溶液。

8.如权利要求1所述的一种诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的试剂均可加入防腐剂。

9.一种诊断试剂盒，用于胃癌早期的诊断，其特征在于，所述诊断试剂盒采用的是现在临床广泛使用的ELISA技术，应用间接法定性检测人血清中抗蛋白质RNF19的IgA抗体，具体是：用人蛋白质RNF19抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中加入待测血清，再与HRP标记的二抗结合，形成RNF19-抗体-酶标二抗复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色，TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色，颜色的深浅和样品中的抗蛋白质RNF19的IgA抗体的水平呈正相关。

10.人蛋白质RNF19在制备胃癌早期诊断试剂中的应用。