[发明专利]抗病毒性出血性败血症病毒G蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及一种抗病毒性出血性败血症病毒G蛋白的单克隆抗体，杂交瘤细胞株及建立一种检测病毒性出血性败血症病毒的夹心ELISA方法。 

背景技术

病毒性出血性败血症是感染虹鳟鱼类的一种严重的致死性传染性疾病。感染该病鱼类的死亡率可达90-100%。它的病原是病毒性出血性败血症病毒（VHSV）。除了在传统的宿主—虹鳟鱼发现VHSV引起疾病的严重暴发外，养殖大菱鲆、养殖或野生牙鲆、白鲑和大西洋鳕鱼等也会发现VHSV。VHSV不仅宿主范围大，而且在不同宿主的致病性具有显著差异，因而使得控制VHS较为困难。目前，在国际动物卫生组织(OIE)和我国进境动物一、二类传染病名录中均被列为必报疫病(世界动物卫生组织, 2000)。 

该病毒属于弹状病毒科Novirhabdovirus属。病毒的基因组为一段单链负链RNA，其线性基因组编码5个蛋白，包括：核衣壳蛋白（N蛋白），两个结构蛋白（M1和M2蛋白），糖蛋白（G蛋白）和RNA聚合酶（L蛋白）。VHSV粒子长约180nm，宽约70nm。其基因组长度为12k 个碱基（Schotze H et al, virus genes,1999；倪穗等，海洋与湖沼，2009）。 

近年来，我国一些地方，特别是北方地区，为了加快发展，大规模发展了冷水鱼类（如：虹鳟）养殖，且取得了巨大的经济效益。过去VHS 主要流行于北美洲和欧洲一些国家(MEIER W et al, Fish Diseases,1980; NISHIZAWA T.et al, Appl. Environ. Microbiol.2006 ; SCHLOTFELDT H.J.et al, Appl.Ichthyol,1988; SKALL H.F, Aquat. Org,2005)。可是随着水生动物及其产品进出口贸易的急剧增加, VHS 已经传入我国, 并在我国局部地区流行(牛鲁祺等, 水产学报，1988)。VHS的有效预报或者诊断是我们必须解决的问题。对其检测或者鉴定的方法有：细胞培养方法、传统血清学方法和分子生物学方法，他们都受限于各自的特点，细胞培养方法和传统血清学方法检测时，费时费力；分子生物学方法存在着假阳性，可信度比较低。单克隆抗体技术的引进，为建立一种简单快速的检测方法提供原料基础。根据VHSV有多种的血清型和基因组具有地域性差异的两个特点，我们依据中国地区养殖环境和养殖鱼类的种类的具体情况，制备出抗VHSV的单克隆抗体，建立一种适合中国地区的简单、快速和准确的诊断技术。 

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种抗病毒性出血性败血症病毒G蛋白的单克隆抗体。 

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种检测病毒性出血性败血症病毒的ELISA试剂盒。 

本发明所要解决的第三个技术问题是提供了一种体外检测病毒性出血性败血症病毒G蛋白的方法。 

本发明所要解决的第四个技术问题是提供了一种抗病毒性出血性败血症病毒G蛋白的单克隆抗体在检测病毒性出血性败血症病毒和制备检测病毒性出血性败血症病毒试剂盒中的应用。 

一种病毒含有多种抗原，一种抗原又可能含有多个抗原位点。因此针对一种抗原可以获得不止一种抗体，但是这些抗体对抗原的结合特性可能是不同的。为了找到能与抗原特异性结合的单克隆抗体，需要进行大量反复比较、筛选和鉴定工作。本发明通过大量的工作，获得了能分泌特异性结合病毒性出血性败血症病毒G蛋白的杂交瘤细胞株；并在此的基础上首次建立了检测病毒性出血性败血症病毒的夹心ELISA检测方法，并制备了检测病毒性出血性败血症病毒的ELISA试剂盒，可用于大规模病毒性出血性败血症病毒的检测，具有很广阔的应用前景。 

为解决上述技术问题，本发明所提供的技术方案如下： 

本发明所提供的抗病毒性出血性败血症病毒G蛋白的单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No.5797的小鼠杂交瘤细胞株分泌产生。该小鼠杂交瘤细胞株已于2012年2月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址是中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号），其保藏编号为CGMCC No.5797，其分类命名为抗病毒性出血性败血症病毒杂交瘤细胞株。

保藏编号为CGMCC No.5797的小鼠杂交瘤细胞株也属于本发明的保护范围。