[发明专利]鹅免疫球蛋白编码区及其恒定区特异性单克隆抗体与应用

说明书

技术领域

本发明涉及鹅免疫球蛋白编码区及其单克隆抗体和应用，特别涉及鹅免疫球蛋白λ链、α链、μ链、υ链恒定区及其单克隆抗体，以及所述单克隆抗体在制备检测或纯化鹅免疫球蛋白试剂中的应用。本发明属于生物技术领域。

背景技术

我国是世界养禽大国，更是世界主要鹅类养殖地和消费国，鹅类养殖业的持续、稳定、健康发展不仅直接关系到我国新农村建设中畜牧业的健康稳定发展，而且关系到人们的生活方式和健康水平。

免疫球蛋白IgM、IgG和IgA是体液免疫的重要效应分子，其含量的变化可以作为检验机体免疫状况和感染情况的指标之一。IgM、IgG分别是感染早期和机体抗感染的重要抗体类型，血清中抗体水平的测定可作为免疫或感染的重要指征。IgA是黏膜免疫的主要因子，其水平的测定可作为黏膜免疫的重要指征。抗免疫球蛋白抗体，包括多克隆抗体和单克隆抗体，可用于检测机体内免疫球蛋白的含量，进而作为疾病诊断与免疫防治的重要工具。王君伟等（2006，CN1817005A）用无水硫酸钠和Sephadex G-200纯化的鸭卵黄免疫球蛋白作为免疫原，制得兔抗鸭IgY+IgY(△Fc)(H+L)多克隆抗体，经辣根过氧化物酶标记后用于检测鸭机体受到刺激后所产生的特异性抗体，并应用于鸭类疾病的检测。王君伟等（2006，CN1818651）用无水硫酸钠和Sephadex G-200纯化的鹅卵黄免疫球蛋白作为免疫原，制得兔抗鹅IgY+IgY(△Fc)(H+L)多克隆抗体，经辣根过氧化物酶标记后用于检测鹅机体受到刺激后所产生的特异性抗体，并应用于鹅类疾病的检测。但多克隆抗体主要来源于动物免疫血清，是多种不同抗原表位特异性抗体的混合，特异性不高，常出现交叉反应，其应用受到一定的限制。McAb具有高度的特异性，已被广泛应用于人类和动物医学方面生物活性物质的鉴定和纯化、病原微生物的鉴定、特定抗原成分的定位功能分析以及疾病的快速诊断和动物免疫水平检测，可与标记物直接偶联制备的单克隆二抗，直接用于临床检测，并有利于实际操作技术的标准化和简便化。抗免疫球蛋白单克隆抗体的研究在人疾病的诊断及应用方面比较系统成熟，哺乳类动物在此方面的研究相对比较成熟，而禽类在此方面的研究相对比较滞后。Van Zaane,D等（1987年）制备和鉴定了针对猪不同免疫球蛋白类和型的单抗，所制备的单抗已成功用于检测猪各种病毒所产生同种型的抗体；赵莉（2006年）用原核表达的鸡IgMμ链蛋白作为免疫原，采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠，四免后进行融合，采用真核表达的鸡、猪、牛IgMμ链蛋白来筛选单克隆抗体，制备出与鸡、猪、牛IgMμ链有交叉反应性的抗鸡IgMμ链单克隆抗体；张红等（2008年）用真核表达的带有信号肽的鸡Igλ轻链作为免疫原，制备出抗鸡Igλ轻链单克隆抗体；王文强等（2010年）以新鲜的鸡胆汁为材料,采用硫酸铵盐析法从鸡胆汁中粗提纯鸡SIgA，SDS-PAGE纯化的SIgA重链为抗原，制备抗SIgA重链的免疫球蛋白；Kothlow,S等（2005年）制备了一系列与鸭白细胞表面抗原反应的单克隆抗体，包括一株与鸭免疫球蛋白轻链反应的单克隆抗体，并用制备的单克隆抗体建立了B型鸭肝炎病毒的替代感染模型；Kothlow,S等（2011年）用抗鸭免疫球蛋白轻链单克隆抗体建立了一种检测水禽NDV的免疫学方法，而有关抗鹅免疫球蛋白单克隆抗体的研究国内外尚未见报道。