[发明专利]一株固氮红细菌及其培养方法与应用

权利要求书

1.一株固氮红细菌（Rhodobacter azotoformans）Y6菌株，2012年5月8日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.6086。

2.权利要求1所述固氮红细菌（Rhodobacter azotoformans）Y6的培养方法，其特征在于，步骤如下：

将固氮红细菌（Rhodobacter azotoformans）Y6按8~12wt%接种量接种于RCVBN培养基中，在温度为25~35℃的条件下恒温光照静置培养48~72小时，即可；

上述RCVBN培养基组分如下：

MgSO₄·7H₂O 0.2g/L，CaCl₂ 0.056g/L，FeSO₄·7H₂O 0.012g/L，Na₂EDTA 0.02g/L，H₃BO₃2.8×10^-3g/L，MnSO₄ 1.6×10^-3g/L，ZnSO₄·7H₂O 2.4×10^-4g/L，Na₂MoO₄·2H₂O 7.52×10^-4g/L，Ca(NO3)₂·3H₂O 4×10^-5g/L，生物素1.5×10^-5g/L，尼克酸1×10^-3g/L，对氨基苯甲酸1×10^-3g/L，盐酸硫胺素1×10^-3g/L，KH₂PO₄ 0.6g/L，K₂HPO₄·3H₂O 0.9g/L，DL-苹果酸4g/L，(NH₄)₂.SO₄ 1g/L，pH6.8，115℃灭菌30分钟。

3.如权利要求2所述的固氮红细菌Y6的培养方法，其特征在于，所述温度为30℃。

4.权利要求1所述固氮红细菌（Rhodobacter azotoformans）Y6在链孢红素或番茄红素脱氢反应中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤如下：

利用PCR技术以固氮红细菌（Rhodobacter azotoformans）Y6菌株基因组DNA为模板，采用上游引物D-F：TGCCATATGATGAGACAGATTGTGCCGAA和下游引物D-R：TCGAAGCTTCCTCGATCGCGAAGCAAGGT，扩增类胡萝卜素crtD基因，将该基因通过表达载体pET-22b在大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达，收集重组大肠杆菌细胞超声波破壁制备重组CrtD粗酶液，再利用重组CrtD粗酶液对链孢红素或番茄红素进行体外脱氢反应，生成3,4-二脱氢链孢红素或3,4-二脱氢番茄红素。