[发明专利]一种检测氯霉素的试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测氯霉素的试剂盒及方法，具体涉及一种用于检测氯霉素的胶体金试纸条，其特别适于动物源性食品中氯霉素残留的检测。

技术背景

氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一种高效广谱抗生素，能够抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，广泛应用于各类家禽、家畜、水产品生产过程中的传染性疾病控制。但氯霉素在食品中的残留会对人体健康构成潜在危害，引起人的骨髓造血机能紊乱，造成再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症及新生儿、早产儿灰色综合症等疾病，欧美等发达国家已相继禁止或严格禁止使用。我国农业部公告第235号文件也规定，氯霉素及其盐、酯（包括琥珀氯霉素）在所有食品动物的所有可食组织中不得检出。

目前用来检测氯霉素的最常用方法主要是气相色谱、液相色谱及色谱-质谱法，这些方法虽然具有灵敏度高、结果准确、重复性好、假阳性少等优点，但仍存在一定缺点，如样品前处理过程复杂，仪器化程度高且价格昂贵，分析速度慢，已逐渐不能满足发达国家及食品加工企业对检测方法检测限的要求。与之相比，免疫学测定方法灵敏度较高、特异性强、试样预处理简单、分析时间短，适合现场监控和大量样本的筛查

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测氯霉素的试剂盒。

本发明所提供的试剂盒包括微孔试剂和试纸，微孔试剂具有微孔塞，试纸包括底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜，其依次连接；所述微孔试剂中冻干有氯霉素特异性抗体-胶体金标记物；氯霉素特异性抗体可为氯霉素单克隆抗体或氯霉素多克隆抗体；反应膜上包括检测区和质控区；当氯霉素特异性抗体为氯霉素单克隆抗体时，检测区包被氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被羊抗鼠抗抗体；当氯霉素特异性抗体为氯霉素多克隆抗体时，检测区包被氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被羊抗兔抗抗体。

所述氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物是由氯霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述氯霉素半抗原是由氯霉素与琥珀酸酐反应得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述氯霉素特异性抗体-胶体金标记物中的氯霉素特异性抗体是以氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。

所述样品吸收垫上粘贴有保护膜，为检测端，上面有MAX标记线。

所述检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一端，所述质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一端。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；所述保护膜为PE材质保护膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试剂盒的方法，其包括步骤：

1）制备冻干有氯霉素特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2）制备具有包被氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和包被抗抗体的质控区的反应膜；

3）将2）制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸；

4）将1）和3）制备好的冻干有氯霉素特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试剂盒。

具体地说，步骤包括：

1）将氯霉素与琥珀酸酐反应，制备氯霉素半抗原；

2）将氯霉素半抗原与载体蛋白偶联，制备氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物；

3）用氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株或用氯霉素半抗原-载体蛋白偶联物免疫兔，得到氯霉素多克隆抗体；

4）提取小鼠IgG或兔IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体；

5）用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

6）将制备的氯霉素特异性抗体加入到制备的胶体金中，得到氯霉素特异性抗体-胶体金标记物；

7）将氯霉素特异性抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂中后，将微孔试剂加上微孔塞；

8）将样品吸收垫用含0.5%牛血清白蛋白（体积百分含量）、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；

9）在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜；

10）将制备好的微孔试剂和试纸组装成试剂盒，2~8℃条件下保存12个月。

本发明的另一个目的是提供一种应用上述试剂盒检测动物源性食品中氯霉素残留的方法，它包括步骤：

（1）样品前处理；

（2）用试剂盒进行检测；