[发明专利]HLA-A*3303限制性WT1肽和包含此肽的药物组合物

说明书

本申请为分案申请，原申请的申请日为2007年2月21日，申请号为200780005970.9(PCT/JP2007/053176)，发明名称为“HLA-A^*3303限制性WT1肽和包含此肽的药物组合物”。

技术领域

本发明涉及HLA-A^*3303限制性肽，具体地说所述肽包含由来自WT1蛋白的9个连续的氨基酸组成的氨基酸序列，其中在氨基酸序列中第2位的氨基酸选自Ala、Ile、Leu、Val、Phe、Tyr、Ser和Asp，并且在氨基酸序列中第9位的氨基酸是Arg。此外，本发明还涉及编码此肽的多核苷酸和包含此肽的用于治疗或预防癌症的药物组合物等等。

发明背景

WT1基因(Wilms肿瘤1基因(Wilms′tumor 1gene))被认为是导致Wilms肿瘤即儿童肾癌的基因(非专利文献1和2)。WT1是具有锌指结构的转录因子。WT1基因起初被认为是肿瘤阻抑基因。然而随后的研究(非专利文献3、4、5和6)表明WT1基因在造血肿瘤和实体癌中起癌基因的作用。

WT1基因在许多类型的恶性肿瘤中高水平表达。对作为自体蛋白的未突变WT1基因产物在活体中是否具有免疫原性已做了验证。这些结果表明了在肿瘤细胞中高水平表达的WT1基因所表达的蛋白经过在细胞内的加工而被片段化。产生的肽和MHC I类分子形成复合体，该复合体被呈递到细胞表面，通过肽的接种可以诱导识别该复合体的CTL(非专利文献7、8和9)。同样表明用WT1肽或WT1的cDNA免疫小鼠，被移植的表达WT1基因的肿瘤细胞被高几率地排斥(非专利文献7和10)；而生理性地表达WT1基因的正常组织没有受到被诱导的CTL的破坏(非专利文献7)。体外人类细胞的实验表明：当具有结合HLA-A^*0201分子(人类MHC I类分子之一)的高能力的Db126肽或WH187肽(SEQ ID No：1的第187-195位的氨基酸，SLGEQQYSV)用于刺激具有HLA-A^*0201的人类外周血单核细胞时，WT1-特异性CTL被诱导。被诱导的CTL具有对高水平地内源表达WT1基因的肿瘤细胞特异的细胞毒活性，该CTL的细胞毒活性是HLA-A2限制性的(非专利文献11)。人类细胞的体外实验表明：使用匹配HLA-A^*2402(其是HLA-A等位基因之中最频繁地出现在日本人中的)的WT1肽(WT1₂₃₅；SEQ ID No：1的第235-243位的氨基酸，CMTWNQMNL)，可以诱导WT1特异性CTL(TAK-1)(非专利文献12)。被诱导的CTL并不阻抑部分地生理表达WT1基因的正常造血干细胞形成集落的活性。这些报道强烈地表明WT1特异性CTL不止可以在小鼠中诱导而且可以在人类中诱导。此CTL具有抗高水平表达WT1基因的肿瘤细胞的细胞毒活性，但不具有抗生理地表达WT1基因的正常细胞的细胞毒活性。(非专利文献7、10、11、12、13和14)。

WT1基因产物作为核内蛋白被呈递并在细胞质内经蛋白酶体加工而片段化成肽。片段化的肽被TAP(与抗原加工有关的转运体)转运到内质网腔中，与MHC I类分子形成复合体并呈递到细胞表面。出于CTL前体细胞经由TCR而识别WT1肽-MHC I类分子复合体的结果，WT1特异性CTL被诱导，从而施加细胞毒的作用于通过MHC I类分子呈递WT1基因产物的肿瘤细胞(非专利文献7、8和9)。那么，定靶WT1基因产物的癌症免疫疗法中所使用的WT1肽至少需要是在活体中结合MHC I类分子的形式。然而MHC I类分子是多种多样的而且结合各自的MHC I类分子的WT1肽的氨基酸序列也是互不相同的。因此，需要提供与各自的MHC I类亚型匹配的肽。然而，迄今仅知道HLA-A^*2402分子限制性肽、HLA-A^*0201分子限制性肽和HLA-A^*2601分子限制性肽是HLA分子限制性的WT1肽(分别见专利文献1、非专利文献11和专利文献2)。HLA-A^*3303以紧随HLA-A^*2402之后的最高百分比出现在日本人中。因此，有必要找出HLA-A^*3303限制性的WT1肽。

专利文献1：WO 2003/106682

专利文献2：WO 2005/095598

非专利文献1：Daniel A.Haber等.，Cell.1990Jun 29；61(7)：1257-69.