[发明专利]一种从珍珠菜中提纯二苯乙烯苷的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药中有效成分提取与分离技术领域，具体涉及从珍珠菜中提取分离二苯乙烯苷的方法。

背景技术

2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(简称二苯乙烯苷)，为白色无定形粉末，易溶于水、甲醇、乙醇，具有重要的药用价值：可明显改善脑损伤动物模型的学习记忆障碍，对老年性痴呆等神经退行性疾病有治疗作用[张兰，邢颖，赵玲，等.不同时程APP转基因小鼠学习记忆改变及参乌胶囊、二苯乙烯苷的干预作用.中国行为医学科学，2006，15(3)：193-196]；可清除自由基，降低体内脂质的过氧化水平，产生延缓衰老的作用[Lv LS，Gu XH，Tang J，et al.Antioxidant activity of stilbene glycosides from poygonum multiflorum.Food Chemistry，2007，104(4)：1678-1681]；能够降低高胆固醇血症动物和高脂小鼠的血浆胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白胆固醇及甘油三酯水平，产生降血脂作用[Yang PY，Almofti MR，Lu L，et al.Reduction of atherosclerosis in cholesterol-fed rabbits and decrease of expressions of intracellular adhesion molecule-1 and vascular endothelial growth factor in foam cells by a water-solution fraction of polygonum multiflorum.J Pharmacol Sci，2005，99(3)：294-300]；抑制血管内皮生长因子(VEGF)等动脉粥样硬化危险因素的产生，起到抗动脉粥样硬化的作用[张伟，王玉琴，李锋，沈燕，王春华.二苯乙烯苷对ox-LDL诱导的U937细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达的影响.中国药理学通报.2008；24(5)：667-672]；此外，还具有肝保护和抗肿瘤等[谢岚.何首乌及二苯乙烯苷的研究进展.天津药学，2010，22(3)：70-73]作用。

二苯乙烯苷结构复杂、稳定性差，合成困难，目前均为从何首乌药材中提取分离制备所得。但由于何首乌药用资源有限，寻找新的价格低廉的提取原料对于二苯乙烯苷的综合开发十分重要。发明人对多种中药材中二苯乙烯苷的含量进行了测定，发现珍珠菜(Lysimachia clethroide Duby)中含有0.49～1.28％的二苯乙烯苷。

珍珠菜(Lysimachia clethroide Duby)为报春花科珍珠菜属多年生草本植物。广泛分布于我国东北、华北、华东、中南、西南及河北、陕西等地，资源十分丰富，以珍珠菜作为二苯乙烯苷的新来源，从中提取二苯乙烯苷，可产生更大的经济效益。

珍珠菜全草入药，具有清热解毒、活血调经、利水消肿等功效。文献报道已从该植物分离得到黄酮、三萜、挥发油、有机酸、甾醇、醌类、生物碱等多种化学成分[任风芝，郑建坤，屈会化，等.珍珠菜脂溶性部位的化学成分研究.解放军药学学报，2001，17(4)：178-180；邹海艳，屠鹏飞.珍珠菜黄酮类化合物的研究.中国天然药物，2004，2(1)：59-61]。其中珍珠菜属植物中都含有丰富的黄酮及黄酮苷，黄酮苷元主要为山柰酚、槲皮素、异鼠李素等。

我们通过进一步制备工艺的探索和研究，开发出工艺简单、有效成分损失少、工艺路线稳定、生产成本低的珍珠菜中制备二苯乙烯苷的工艺。

发明内容

本发明提供一种工艺稳定、收率和纯度高的珍珠菜中提取、分离、纯化二苯乙烯苷的方法，该制备方法包括以下步骤：

取珍珠菜药材，粉碎成粗粉，用40～80％乙醇提取，提取液减压浓缩至每毫升含原药材量0.5～2.0g的浸膏，用乙醚或石油醚萃取，有机溶剂萃取过的水溶液加3～6倍药材重量的去离子水稀释后，以3000转/分的转速离心10分钟，上清液上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱除杂，弃去，再用20～30％浓度乙醇洗脱杂质，然后再用40～60％的乙醇解吸，收集解吸液，减压浓缩至小体积，冷冻干燥，得二苯乙烯苷粗品；将二苯乙烯苷粗品溶解于氯仿-甲醇(1∶1)中，上葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱，用氯仿-甲醇(1∶1)洗脱，同时用高效液相色谱监测至洗脱液中无二苯乙烯苷为止，收集洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥得二苯乙烯苷。