[发明专利]一种细脚拟青霉的液体栽培方法

说明书

技术领域

    本发明涉及一种细脚拟青霉的栽培方法，更具体涉及一种细脚拟青霉的液体栽培方法。

背景技术

细脚拟青霉（Paecilomyces tenuipes (Peck) Samson）是高雄山虫草（Cordyceps takaomontana Yakushijiet Kumazaw）的无性型，以天然冬虫夏草作对照分析表明，细脚拟青霉的主要化学组分如甾醇类、糖醇类、生物碱、有机酸类和微量元素与前者十分相似，所含氨基酸种类亦相同,但多种氨基酸含量却高于冬虫夏草。在日本和韩国该菌已被成功作为冬虫夏草替代品进行了开发利用。药理作用方面的研究表明细脚拟青霉具有抗肿瘤、抗菌、抗氧化和免疫调节功能。据已报道的相关文献，细脚拟青霉一般采用固体栽培的方式进行，液体栽培的方式还未报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细脚拟青霉的液体栽培方法，该方法相较于固体栽培，具有操作简单，菌种的流动性好，接种后容易分散等优点。

本发明采取的技术方案如下：

将斜面菌种活化后，取菌块接种到马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基中，于25-28 ℃摇瓶培养7-10d，制备液体菌种；取液体菌种，以5－20%的接种量，接种到马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基中，培养条件为：20-25 ℃，培养30-40 d；所述马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基的组成为：马铃薯5－30%，葡萄糖0.5－5%，蛋白胨0.1－2%，余量为水。

本发明采用液体栽培，相较于固体栽培，其操作简单，菌种的流动性好，接种后容易分散，不易污染及生长速度快等优点。

具体实施方式

实施例1

细脚拟青霉的液体栽培步骤如下：

1）配制液体培养基。所述的液体培养基为马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基（200 g马铃薯去皮，切成小块，加水煮沸20 min，八层纱布过滤，收集马铃薯滤液，加入葡萄糖20 g，蛋白胨10 g，用水定容至1 L），121℃，高压蒸汽灭菌30 min。

2）液体菌种制备。将细脚拟青霉斜面菌种活化，将活化的斜面菌种挑出按0.5～1.0cm²菌块接种到装有150 ml的所述液体培养基的三角瓶中，于28 ℃，230 rmp/min的摇床中培养7d，制备液体菌种。

3）细脚拟青霉的液体静置栽培。将液体菌种以10%接种量，接种到装有4 L马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基的培养瓶中，于25℃培养35d。

4）采收。经过35天培养，细脚拟青霉子实体可以采收，子实体干重的收率为2.50　g/，子实体的长度可达到52mm左右（图1）。

待细脚拟青霉生长成熟后，不仅可采收子实体，而且其发酵液中含有大量具有生理活性的物质，如含有具有降胆固醇作用的葵内酯结构类似物等活性化合物。发酵液用旋转蒸发仪真空浓缩，而后用乙酸乙酯萃取，真空浓缩成膏状，再应用反相硅胶、凝胶和正相硅胶等层析技术可分离提取葵内酯等各类活性化合物。因此采用液体栽培细脚拟青霉具有良好的经济效益。

实施例2

细脚拟青霉的液体栽培步骤如下：

将斜面菌种活化后，取菌块接种到马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基中，于25℃摇瓶培养10d，制备液体菌种；取液体菌种，以5%的接种量，接种到马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基中，培养条件为：23 ℃，培养30d；所述马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基的组成为：马铃薯5%，葡萄糖5%，蛋白胨2%，余量为水。

实施例3

细脚拟青霉的液体栽培步骤如下：

将斜面菌种活化后，取菌块接种到马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基中，于22℃摇瓶培养8d，制备液体菌种；取液体菌种，以20%的接种量，接种到马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基中，培养条件为：20℃，培养40d；所述马铃薯葡萄糖蛋白胨液体培养基的组成为：马铃薯30%，葡萄糖0.5%，蛋白胨0.1%，余量为水。