[发明专利]一种转化头孢菌素C的基因工程菌及其制备方法有效
| 申请号： | 201210163142.0 | 申请日： | 2012-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN103421727A | 公开（公告）日： | 2013-12-04 |
| 发明（设计）人： | 邵雷;李继安;黄娟娟;郭兆霞;陈代杰 | 申请（专利权）人： | 上海医药工业研究院;中国医药工业研究总院 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/31;C12N15/63;C12P35/06;C12R1/465 |
| 代理公司： | 北京市金杜律师事务所 11256 | 代理人： | 陈长会;谢燕军 |
| 地址： | 200040 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转化 头孢菌素 基因工程 及其 制备 方法 | ||
1.转化头孢菌素C的基因工程菌，其特征在于，其是在棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)野生菌株的基因组中整合基因cmcJ的表达盒的工程菌，所述的基因cmcJ的核苷酸序列是SEQ ID NO.2的第1203-2271位所示的序列。
2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述的基因cmcJ的表达盒依次含有启动子序列、基因cmcJ和终止子。
3.如权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述的启动子是红霉素抗性基因启动子PermE*，其核酸序列是SEQ ID NO.1第1-469位所示的序列。
4.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述的cmcJ基因是来源于棒状链霉菌。
5.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因cmcJ的表达盒在棒状链霉菌野生菌株的基因组中的整合位点是attB位点。
6.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述的棒状链霉菌野生菌株是棒状链霉菌Streptomyces clavuligerus ATCC27064。
7.重组载体，其特征在于，含有基因cmcJ的表达盒，所述的基因cmcJ的编码序列是SEQ ID NO.2第1257-2189位所示的序列。
8.如权利要求7所述的重组载体，其特征在于，所述的重组载体的骨架是pSET152。
9.如权利要求7所述的重组载体，其特征在于，所述的cmcJ基因的表达盒依次含有启动子序列、基因cmcJ的编码序列和终止子。
10.如权利要求7所述的重组载体，其特征在于，所述的启动子是红霉素抗性基因启动子PermE*，其核苷酸序列是SEQ ID NO.1第1-469位所示的序列。
11.转化子，其特征在于，其含有权利要求7-10任一项所述的重组载体。
12.如权利要求11所述的转化子，其特征在于，所述转化子的宿主细胞选自大肠杆菌ET12567（pUZ8002）、S17-1或者DH5α。
13.制备如权利要求1-6任一项所述的转化头孢菌素C的基因工程菌的方法，其特征在于，包括将权利要求11所述的转化子与棒状链霉菌Streptomyces clavuligerus ATCC27064接合，挑选同源重组接合子。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述的转化子的宿主为大肠杆菌ET12567（pUZ8002）、S17-1或者DH5α。
15.制备甲氧基头孢菌素C的方法，包括培养如权利要求1-6任一项所述的基因工程菌，利用粗酶液转化法获得甲氧基头孢菌素C。
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