[发明专利]用于拮抗太子参根际土壤尖孢镰刀菌的多粘类芽孢杆菌

说明书

技术领域

本发明涉及一株用于拮抗太子参根际土壤尖孢镰刀菌的多粘类芽孢杆菌。

背景技术

太子参是一种补益性中药材，补益脾肺，益气生津，治肺虚咳嗽，脾虚食少，心悸，怔忡，水肿，消渴，精神疲乏。用于脾气虚弱，胃阴不足，食少体倦，口渴舌干；肺虚燥咳，咽干痰粘；气阴不足，心悸失眠。其药性缓和，还适合病后虚弱者使用。太子参还作为中成药健胃消食片的主要成分，乃至作为保健饮片出口东南亚等国。

太子参用途广泛，市场需求越来越大。但是，其连作障碍极其严重，即在同一块地里连续种植太子参，即使在加强田间管理的情况下，其生长状况变差，叶片光合作用速率显著下降，最终导致其产量急剧降低到前茬的1/2至1/3以下、甚至绝收，其品质变劣，多糖和总人参皂苷含量显著下降。申请人经过研究证实：种植太子参后，根际土壤中尖孢镰刀菌(F.oxysporum)数量极显著增加；将分离到的尖孢镰刀菌接种于种植太子参的健康土壤中，尖孢镰刀菌在健康土壤中大量增殖，且侵染太子参根部，引发太子参病害。

发明内容

为此，本发明从土壤中筛选到一株高效拮抗太子参根际土壤尖孢镰刀菌的多粘类芽孢杆菌。

本发明提供的一株用于拮抗太子参根际土壤尖孢镰刀菌的多粘类芽孢杆菌，为多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）S960,已于2012年4月18日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCC No.6021。

该菌可在在芽孢杆菌通用培养基中培养发酵。培养基为：培养基成分：葡萄糖0.7%；蛋白胨0.5%；牛肉膏0.3%；MgSO₄·7H₂O 0.02%；pH  7.5-7.6。

该菌在改良高氏I号培养基（可溶性淀粉20.0g，KNO₃ 1.0g，K₂HPO₄ 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，NaCl 0.5g, FeSO₄·7H₂O 0.01g，琼脂15g，蒸馏水1000mL）上生长良好，菌落呈黄色，凸起，表面湿润且光滑。其气生菌丝生长旺盛，分枝多；基内菌丝无横隔、不断裂（图1）。

在油镜下（目镜10×，物镜100×）下观察到的孢子丝细、长，孢子卵圆形。该菌株经形态学和16s RNA分子生物学鉴定，确定为多粘类芽孢杆菌。

该菌株能较广泛利用碳源，包括：L-鼠李糖、蔗糖、D-葡萄糖和D-甘露醇，但对部分碳源不利用，包括：D-果糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、L-肌醇、麦芽糖及纤维二糖，也能较广泛利用氮源，可以使明胶液化、牛奶凝固及胨化，可产生硫化氢，但是对淀粉不水解，也不利用纤维素。

本发明的多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）S960,可高效抑制太子参根际土壤的尖孢镰刀菌，在该领域的应用前景广阔。该菌株已于2012年4月18日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保蒇，其简称CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No. 6021。

附图说明

图1为多粘类芽孢杆菌S960在高氏合成1号琼脂培养基生长图。

图2为多粘类芽孢杆菌S960对尖孢镰刀菌的抑菌效果。

具体实施方式

1、多粘类芽孢杆菌S960的分离与纯化

（1）制备土壤悬浮液：取一定量种植过两年太子参的土壤（福建省柘荣县太子参GAP生产基地），自然风干后在研钵内研磨，当土壤颗粒较均一，无大颗粒时停止。称取10 g研磨好的土壤，放入装有90mL无菌水的三角瓶中充分振荡，制成10^-1的土壤稀释液。从上述溶液中取出1mL加到9mL无菌水中充分振荡制成10^-2的稀释液，以此类推，制成10^-3、10^-4、10^-5倍的土壤溶液备用。