[发明专利]一种检测苯甲酸雌二醇的酶联免疫试剂盒

权利要求书

1.一种检测苯甲酸雌二醇的酶联免疫试剂盒，其中包括：96或48孔包被板(1)，苯甲酸雌二醇标准品(2)，抗苯甲酸雌二醇的单抗冻干品(3)，酶标记的羊抗鼠抗体冻干品(4)，洗涤液(5)，显色液A(6)，显色液B(7)和终止液(8)。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述酶标记的羊抗鼠抗体冻干品为HRP-羊抗鼠抗体冻干品，洗涤液为含有吐温的Tris-HCl缓冲溶液，显色液A为含有过氧化氢的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液，显色液B为四甲基联苯二胺的乙醇水溶液，终止液为硫酸溶液。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的包被板(1)包被固相抗原苯甲酸雌二醇-BSA或苯甲酸雌二醇-KLH或苯甲酸雌二醇-OVA；用50mmol/L pH9.6的Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲液将苯甲酸雌二醇-BSA或苯甲酸雌二醇-KLH或苯甲酸雌二醇-OVA稀释至10mg/L做为包被液，96或48孔微孔板每孔加0.1mL包被液，4℃放置过夜，弃去包被液，冲洗三次，每孔加0.15mL含3g/L BSA或KLH或OVA的50mmol/L pH9.6的Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲液封闭，4℃放置过夜，弃去封闭液，真空抽干，板条密封后置-20℃冷冻保存。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的苯甲酸雌二醇标准品(2)，共6瓶，浓度分别为：0ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，40ng/mL，80ng/mL，200ng/mL。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的抗苯甲酸雌二醇的单抗冻干品(3)，为抗苯甲酸雌二醇的单克隆抗体的冻干品。

6.根据权利要求5所述的抗苯甲酸雌二醇的单克隆抗体，其制备方法如下：将苯甲酸雌二醇和BSA或KLH或OVA偶联作为抗原，免疫雌性BalB/c小鼠，检测多抗效价达到1∶2000后，在PEG-4000作用下将免疫的小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合，经过HAT选择培养，用间接ELISA法检测培养上清，对检出的阳性克隆孔采用有限稀释法进行亚克隆，雌性小鼠BalB/c腹腔注射液体石蜡、杂交瘤细胞，经培养后抽取腹水，腹水中即含有抗苯甲酸雌二醇的特异性单克隆抗体。

7.一种用权利要求1所述的试剂盒检测苯甲酸雌二醇的方法，其特征在于：取包被有苯甲酸雌二醇-BSA或苯甲酸雌二醇-KLH或苯甲酸雌二醇-OVA的微孔包被板，加入苯甲酸雌二醇标准品或处理好的样品到各自的微孔中，再加入苯甲酸雌二醇抗体，暗处静置反应，洗涤液洗涤，加酶标记的羊抗鼠抗体，进行标记免疫反应，洗涤液洗涤，加显色液A和显色液B，暗处静置后加终止液，在450nm处测量吸光度值，对照标准曲线计算样品中的苯甲酸雌二醇含量。

8.根据权利要求7所述的检测苯甲酸雌二醇的方法，其操作为：样品前处理；取包被有苯甲酸雌二醇-BSA或苯甲酸雌二醇-KLH或苯甲酸雌二醇-OVA的微孔包被板，加入0.05mL的苯甲酸雌二醇标准品或处理好的样品到各自的微孔中，加0.05mL抗苯甲酸雌二醇抗体，37℃暗处静置30min，洗涤液洗三次，加0.1mL酶标记的羊抗鼠抗体，37℃暗处静置30min，用洗涤液洗三次，加0.05mL显色液A和0.05L显色液B，暗处静置15min后加终止液，在450nm处测吸光度值，从标准曲线计算样品中的苯甲酸雌二醇含量。