[发明专利]抗菌药物敏感试验用的测试盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于体外诊断试剂领域，具体涉及一种细菌（或真菌）药物敏感试验测试盒的制备方法及其临床应用。

背景技术

抗生素和抗菌药(以下统称抗菌药)的广泛使用，使我们在成功进行抗感染的同时，亦引起了细菌（或真菌）耐药性的发生。由于细菌（或真菌）对抗菌药的敏感性会发生变化，因此，在选择使用抗菌药来抗感染之前，必须进行抗菌药物的敏感性试验（antimicrobial susceptibility test，AST），以便正确选用抗菌药并有效地控制感染。

抗菌药物的敏感试验常用的方法有纸片法和稀释法。纸片法药敏试验属定性试验方法，通常只能报告敏感、耐药或中介三种结果，虽然方便但提供的信息较少，不能对各种敏感药物之间进行比较和择优选用。稀释法除了可报告敏感、耐药和中介以外，还可报告最小抑菌浓度（MIC）的具体数据，提供的信息多，临床应用价值较大。稀释法有肉汤稀释法和琼脂稀释法，肉汤法又有试管肉汤稀释法和微量稀释法之分。试管稀释法操作繁琐，不利于大量检测；微量稀释法虽然较试管稀释法的试剂和标本用量少，但仍然比较麻烦且结果阅读没有试管稀释法清晰；琼脂稀释法利于大量检测，但不适用于常规个别临床标本的检测，而且只能现做试验现配含药培养平板，亦比较麻烦。近年来流行一种浓度梯度纸条法（E test）的试纸条，结合了纸片法方便和稀释法可以给出MIC的优点，但价格较贵且MIC结果不是很准，逐渐显示出方法本身的缺陷。

目前临床上迫切需要一个既利于单个标本操作，而准确方便，既能定性又能定量给出MIC的药敏试验方法和试剂。本药物敏感试验的测试条就是为了这一目的而创制的。

发明内容

本发明是针对市场上或临床上现有药敏试验试剂或方法的不足，建立一种全新的药敏方法，达到既方便又准确，既能定性又能定量，既便于批量操作又适合单个操作的目的。本发明的另一个目的是提供这种药敏试验测试盒的制备方法和利用该测试盒测定药物最小抑菌浓度（MIC）的方法。

本发明首先提供一种抗菌药物敏感试验用的测试盒，包括盒体1和能够盖住盒体上沿的盒盖2，盒体1内部设有横隔3，横隔3之间形成空室4，空室4中含有抗菌药物和凝胶条块。

进一步地，横隔3的游离边缘5薄于远游离边缘5端，形成利于切割的刀口。

进一步地，空室4中的抗菌药物的量依次按倍比梯度排列。此处“依次”的含义为按空室的顺序，将抗菌药物的量由小到大（或由大到小）规律排列。

进一步地，上述的凝胶条为用可供细菌生长的培养基制成的可切割凝胶。优选地，所述的可切割凝胶条为琼脂凝胶、琼脂糖凝胶、明胶凝胶或聚丙烯酰胺凝胶。

本发明还提供所述的抗菌药物敏感试验的测试盒用的制造方法，该方法包括如下步骤：

a.测试盒模压成型，灭菌；灭菌方法可以使采用环氧乙烷、辐照或其它可行的方法灭菌；

b.在无菌条件下,将测试量的抗菌药物溶液依次、按倍比梯度加入测试盒的空室中，真空干燥；

c.以液体培养基为溶剂，无菌配制一定浓度的溶胶注入条状模具中，使其凝固制成凝胶条；

d.将测试盒及凝胶条无菌包装于塑料袋中。

上述测试盒可以有多种尺寸和空室数，小型（内部）尺寸可以采用长6.6cm×0.6cm；

上述的制造方法中，所用的抗菌药物溶液，可以先配成储存液，-20℃以下保存备用，临用时配成应用液。按内部尺寸为6.6cm（连同两端的长度为6.8cm）×0.6cm的塑料盒分为十一个空室的设计，如果凝胶条的厚度为4mm，则每格凝胶体积为144μl。药液的加入量在各个空室中可以设计为对数等距的倍比关系，使最终在凝胶中的药物浓度为0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0和64.0μg/ml;另外一个空室不含药，用于细菌生长对照。对于具体抗菌药，浓度设计可以向两端平移，但总的空室数可不变（如含药空室数为10）。

上述的制造方法中，所用的液体培养基，因试验菌的不同而不同，对于一般致病菌，采用Mueller-Hinton 肉汤（MHB）；对于金黄色葡萄球菌测定苯唑类青霉素的MIC时，MHB中要加2%氯化钠；对于嗜血杆菌采用HTM（嗜血杆菌试验培养基）；对于淋球菌采用含1%添加剂的GC肉汤；对于链球菌采用MHB添加2.5%的溶解马血。所用凝胶可以是琼脂凝胶或其它凝胶。

本发明还提供利用所述的抗菌药物敏感试验的测试盒测试药物最小抑菌浓度的方法，该方法包括如下步骤：