[发明专利]血清中肌酐的二步酶法测定方法及测定试剂

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，具体涉及一种血清中肌酐的二步酶法测定方法及测定试剂。

背景技术

肌酐（Cr）是一种低分子含氮化合物，相对分子质量116,000。Cr主要由肌肉产生，是肌酸的终末代谢产物，正常情况下，人体内Cr的含量基本稳定，一般维持在3~14mg/L，仅仅由肾小球排泄，不被肾小管重吸收，由于Cr是小分子物质不与血浆蛋白结合，所以测定血清Cr浓度及根据血清Cr与尿酐浓度计算所得的Cr清除率是既简单又可靠的肾小球滤过功能指标，深受临床重视。

临床实验室对于血和尿中Cr的测定常用酶法或碱性苦味酸法（Jaffe法），Jaffe法虽然试剂较便宜，但线性范围窄，易受血清中其他假性Cr物质的干扰，尤其是当血清胆红素值≥165.5μmol/L时开始出现负偏差，而且血清胆红素越高偏差越大。此外。Jaffe法受到酮体、乳糜血和溶血的严重干扰，头孢类和维生素C及多巴胺等药物也使其结果出现较大干扰。

酶法利用Cr在肌酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶等酶及显色剂和水、氧的共同作用下生成醌亚胺（红色），通过检测反应终点的吸光度来推算样品中Cr的含量，酶法不管是一步酶法或两步酶法，测定过程中Cr水解后产生的肌酸和内源性肌酸同时转化为醌亚胺，Cr测定结果包括了Cr和肌酸之和。正常男性血Cr参考范围为53~106μmol/L，女性44~88μmol/L；正常男性血肌酸参考范围为15~45μmol/L，女性为30~80μmol/L，当发生急性肌损伤、饥饿、糖尿病、营养不良、甲亢、发热时肌酸显著升高，对Cr造成的偏差更显著。

为解决内源性肌酸干扰，仅以肌酐酶为第二试剂的两步酶测定方法，由于第一步反应体系中有4-AAP和色原，肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶催化作用产生醌亚胺，肌酸被转化而被耗尽，当加入肌酐酶后启动Cr水解反应生成肌酸，再经肌酸酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶催化作用产生醌亚胺，反应过程如下：

第一步反应

第二步反应

内源性肌酸和Cr水解产生的肌酸先后呈色，仪器以第一步反应产生的醌亚胺为空白，仅以第二步产生的醌亚胺计算出肌酸的含量，以此去除内源性肌酸的影响，但由于正常情况下，内源性肌酸产生的吸收信号较低且不稳定，因此该法试剂准确度、精密度较差，临床结果重复性不好，无法满足常规检测要求。

发明内容

本发明针对现有技术的上述不足，提出一种可规避以过氧化物酶氧化过氧化氢造成的本底升高、致使检测结果准确度、精密度不好的血清中肌酐的二步酶法测定方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种血清中肌酐的二步酶法测定方法，利用肌酐测定试剂的试剂1中的过氧化氢酶消除内源性肌酸产生的过氧化氢，进而由肌酐测定试剂试剂2中的过氧化氢酶抑制剂抑制试剂1中的过氧化氢酶，从而测定样本中肌酐含量的方法，其具体的反应过程如下：

第一步反应

第二步反应

抑制剂抑制过氧化氢酶活性    （4）

上述的肌酐测定试剂的试剂1中包含过氧化氢酶，肌酸酶，肌氨酸氧化酶和色原，试剂2中包含过氧化氢酶抑制剂，肌酐酶，过氧化物酶和4-氨基安替比林；其中过氧化氢酶抑制剂为叠氮化物,羟胺,氟化物,醋酸盐,甲酸盐,乙醇、甲醇中的一种或几种。

本发明上述血清中肌酐的二步酶法测定方法的测定试剂由试剂1和试剂2组成，其中试剂1、2各组分及浓度范围为：

试剂1：

试剂2：

试剂可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以制成液体试剂，直接使用。