[发明专利]远志皂苷在制备基质蛋白金属酶抑制剂中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及远志皂苷的新用途，特别涉及远志皂苷在制备基质蛋白金属酶抑制剂中的新用途，属于生物医学领域。

背景技术

远志是我国常用的传统中药材,为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd.或卵叶远志(西伯利亚远志)Polygala sibirica L.的干燥根。始载于《神农本草经》,被列为上品，视为养命要药。具有安神益智、祛痰,消肿等作用。远志富含皂苷类、寡糖酯类化合物，近年来现代药理学研究表明远志皂苷（Tenuigenin，TEN）是远志发挥抗衰老、抗痴呆，抗氧化应激和神经保护作用的主要有效成分，对神经系统疾病具有重要的作用。远志皂苷的结构如下所示：

基质金属蛋白酶（Matrix Metalloproteinases,MMPs），是一类依赖于Zn²⁺的内肽酶家族，金属基质蛋白酶9（Matrix Metalloproteinase 9,MMP 9）属于MMPs家族的基底膜性胶原酶，近年来发现在帕金森病、脑中风等疾病中，其表达水平可通过多种途径被上调，并发挥一定的致病作用，有望成为治疗这些疾病的新靶点。如帕金森病时，激活的小胶质细胞可分泌过量的MMP9，通过参予炎症、氧化应激和蛋白质异常聚集等多种病理反应，导致多巴胺能神经元坏死。目前体内外实验均证实MMP9抑制剂具有保护神经元的作用，干预MMP9的表达有望成为治疗帕金森病及其他与MMP9参与的相关疾病的新靶点。

目前已证实远志皂苷具有抗氧化和抗凋亡作用，但其具体的药理作用机制尚不明确。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明对远志皂苷的作用机制进行了深入的研究，结果发现，远志皂苷能够作为基质蛋白金属酶（MMP）的抑制剂抑制基质蛋白金属酶基因的转录从而抑制该蛋白酶的表达。

因此本发明提出了远志皂苷在制备基质蛋白金属酶（MMP）抑制剂中的新用途。

在本发明中，优选的所述的基质蛋白金属酶为基质蛋白金属酶9（MMP9）或金属基质蛋白酶2（MMP2）。

进一步的，本发明还提供了一种基质蛋白金属酶抑制剂，其特征在于所述的抑制剂中含有远志皂苷。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明采用体外培养的原代大鼠小胶质细胞，以革兰氏阴性细菌细胞壁脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）作为刺激剂建立炎症细胞模型。

剂量选择：本发明人所在实验室的前期结果表明，远志皂苷在10^-7M~10^-4M的浓度范围对MN9D细胞（大鼠多巴胺能神经元细胞系）的细胞活力没有显著影响，本研究选取了10^-6M,10^-5M和10^-4M三个浓度的远志皂苷，首先观察了其对小胶质细胞细胞活力的影响。结果表明，这三个浓度对小胶质细胞的细胞活力无显著影响，表明在10^-6M~10^-4M的范围内远志皂苷对小胶质细胞无明显毒性反应。

实验分组：阴性对照组、LPS组、远志皂苷低剂量（终浓度为10^-6M）、中剂量（终浓度为10^-5M）和高剂量（终浓度为10^-4M）组，以及阳性药（米诺环素）对照组。各组细胞加药预处理30分钟后，加刺激剂，继续培养48小时后，收集细胞上清。应用酶谱法检测细胞上清中MMP 9和MMP 2的含量变化；Real-time PCR检测小胶质细胞MMP9、MMP2mRNA水平变化。

1、酶谱法结果显示：

（1）终浓度为10^-4M，10^-5M与10^-6M的远志皂苷呈浓度依赖性显著抑制LPS诱导的pro-MMP9释放，pro-MMP9的释放分别减少了55.0%,44.0%和28.2%。

（2）与阴性对照组相比，虽然LPS并未显著上调MMP2前体（pro-MMP2）的分泌，然而，高浓度的远志皂苷对pro-MMP2的分泌也有显著抑制作用。

2、RT-PCR结果显示：

（1）阴性对照组MMP9mRNA含量很低，LPS处理24h后，MMP9基因表达水平明显升高。经终浓度为10^-4M与10^-5M的远志皂苷处理后，MMP9mRNA的水平显著下降。说明了远志皂苷能够作为基质蛋白金属酶（MMP）的抑制剂抑制基质蛋白金属酶的表达。