[发明专利]一种利用两段pH控制生产碱性果胶酶的方法

权利要求书

1.一种利用两段pH控制生产碱性果胶酶的方法，其步骤如下：

（1）种子培养：在无菌的条件下，活化斜面菌种枯草芽孢杆菌CCTCC NO:M200038，并接种至50ml种子培养基中进行种子培养，36-37°C摇床震荡培养7-9h；

（2）初发酵：将种子培养液接种至装有发酵培养基的7.5L发酵罐，进行发酵培养，发酵罐装液量3-4L，接种量10%，温度33-34°C，通气量2.5-4.5L min^-1；

（3）pH控制I：采用体积浓度为10%的磷酸和氨水通过在线反馈控制初发酵液pH值，将pH控制在5.4-7.0；

（4）补料培养基中的淀粉预处理：用中温淀粉酶对补料培养基中的淀粉进行液化处理，加酶量为32.5U g^-1，液化温度为55°C，液化时间为30min；

（5）补料发酵：初发酵至16h，按初发酵培养基体积量20%补加预处理后的补料培养基，继续发酵，发酵温度为33-34°C，通气量为2.5-4.5Lmin^-1；

（6）pH控制II：采用体积浓度为10%的磷酸和氨水通过在线反馈控制补料后发酵液pH值，将pH控制在4.9-6.5；发酵周期为36-48h；

（7）粗酶液制备：发酵完毕后，将发酵液12000rpm离心10min，上清液即为含有碱性果胶酶的粗酶液；

上述种子培养基组成是：葡萄糖11g L^-1，酵母粉4,5g L^-1，蛋白胨4.5g L^-1，NaCl 4.5g L^-1，K₂HPO₄10g L^-1，pH 8.0；

上述发酵培养基组成是：淀粉20g L^-1，麦麸40g L^-1，(NH₄)₂SO₄1.5g L^-1，MgSO₄·7H₂O1gL^-1；

上述补料培养基组成是：淀粉122.5g L^-1，麦麸10.5g L^-1，(NH₄)₂SO₄10g L^-1，MgSO₄·7H₂O 6.5gL^-1。

2.如权利要求1所述利用两段pH控制生产碱性果胶酶的方法，其特征在于，步骤（3）所述初发酵液pH值控制在5.6-6.8。

3.如权利要求2所述利用两段pH控制生产碱性果胶酶的方法，其特征在于，步骤（3）所述初发酵液pH值控制在6.2±0.2。

4.如权利要求1所述利用两段pH控制生产碱性果胶酶的方法，其特征在于，步骤（6）所述补料后发酵液pH值控制在5.1-6.3。

5.如权利要求4所述利用两段pH控制生产碱性果胶酶的方法，其特征在于，步骤（6）所述补料后发酵液pH值控制在5.7±0.2。