[发明专利]一种制备EV71疫苗的重组双歧杆菌及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201210171975.1 | 申请日： | 2012-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN102703369A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 邓启文;余治健;曾位森 | 申请（专利权）人： | 邓启文;余治健;曾位森 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;A61K39/125;A61P31/14;C12N15/74;C12R1/01 |
| 代理公司： | 深圳市启明专利代理事务所 44270 | 代理人： | 陈三九 |
| 地址： | 518052 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 ev71 疫苗 重组 杆菌 及其 方法 应用 | ||
1.一种制备EV71疫苗的重组双歧杆菌，其特征在于：所述重组双歧杆菌为转化入外源载体的双歧杆菌，所述外源载体为含VP1蛋白编码序列的载体。
2.根据权利要求1所述的重组双歧杆菌，其特征在于：所述含VP1蛋白编码序列的载体为pBAD-VP1载体。
3.根据权利要求2所述的重组双歧杆菌，其特征在于：所述pBAD-VP1载体由pBAD/S载体和EXS-(His)6-VP1基因连接组成。
4.根据权利要求3所述的重组双歧杆菌，其特征在于：所述pBAD/S载体由pBAD/gIII和重组双链E.SOD序列连接组成。
5.根据权利要求4所述的重组双歧杆菌，其特征在于：所述重组双链E.SOD序列由T7启动子和双链E.SOD序列的编码序列组成，其序列如序列表1所示。
6.一种治疗EV71的疫苗，所述疫苗包括活性成分和药学上可接受的载体，其特征在于：所述活性成分为权利要求1～5中任一权利要求所述的重组双歧杆菌。
7.一种制备EV71疫苗的重组双歧杆菌的制备方法，包括下述步骤：
(1)、对重组双链E.SOD序列和pBAD/gIII载体分别进行酶切，用连接酶将双链E.SOD序列连接入双酶切后的pBAD/gIII载体，转化大肠杆菌，挑取阳性克隆，测序鉴定，得到pBAD/S载体；所述重组双链E.SOD序列由T7启动子和双链E.SOD序列的编码序列组成；
(2)、人工合成双链EXS-(His)6-VP1基因，对pBAD/S载体进行双酶切，将双链EXS-(His)6-VP1基因插入双酶切后的pBAD/S载体中，转化大肠杆菌后获得阳性克隆pBAD-VP1载体；
(3)、将pBAD-VP1载体转化双歧杆菌，筛选pBAD-VP1转化阳性的双岐杆菌，即得制备治疗EV71疫苗的重组双歧杆菌。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中对重组双链E.SOD序列和pBAD/gIII载体分别用BstI1071酶进行酶切，用T4连接酶进行连接；步骤(2)中对pBAD/S载体用BpiI酶和XbaI酶进行双酶切，用T4连接酶进行连接。
9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于：将pBAD-VP1载体转化双歧杆菌后用含氨苄西林的MRS 固体培养基进行筛选。
10.权利要求1-5中任一权利要求所述的重组双歧杆菌在制备治疗EV71药物中的应用。
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