[发明专利]1,1-二甲基-β-咔啉羧酸修饰的RGD肽，其合成，抗血栓作用和应用

说明书

技术领域

本发明涉及通式I代表的1，1-二甲基-β-咔啉羧酸修饰的RGD肽(式中AA₁为Ala时，AA₂为Val；AA₁为Ala时，AA₂为Phe；AA₁为Ala时，AA₂为Ser；AA₁为Arg时，AA₂为Val；AA₁为Arg时，AA₂为Phe；AA₁为Arg时，AA₂为Ser)，涉及它们的制备方法，还涉及它们的抗血栓活性以及它作为抗血栓剂的应用。本发明属于生物医药领域。 

背景技术

在全球范围内，血栓性疾病的发病率和死亡率都居首位。血栓患者体内的血栓有两种，一种是由血小板通过纤维蛋白原与白血球交联构成的血栓，另一种是由血小板通过纤维蛋白原与血小板交联构成的血栓。 

P-选择素以溶解型P-选择素和不溶型P-选择素两种形态存在。在血小板活化状态下，不溶型P-选择素从血小板内膜层快速移动到活化的血小板的表面表达并被切割为溶解型P-选择素进入血液循环。溶解型P-选择素介导形成大量稳定的由血小板通过纤维蛋白原与白血球交联构成的血栓。虽然抑制不溶型P-选择素表达并被切割为溶解型P-选择素被认为是是设计抗血栓药物的重要靶点，但是几乎没有抗血栓化合物与这个靶点相关联。这种状况使得发明人把寻找抑制不溶型P-选择素表达并被切割为溶解型P-选择素的化合物作为重要研究方向。在合理设计和广泛的筛选结果的支持下，结构式II代表的1，1-二甲基-β-咔啉羧酸被确定为先导化合物之一。实验研究表明，在10^-8M浓度下它能够使大鼠活化的血小板表达P-选择素的量从215.20±3.01ng/ml降低到112.33±3.10ng/ml(p＜0.001)。 

血小板被激活时糖蛋白IIb/IIIa外化，与纤维蛋白原结合，使血小板通过纤维蛋白原与血小板交联构成血栓。研究糖蛋白IIb/IIIa与纤维蛋白原α链及纤维蛋白原γ链的结合方 式，确定了RGDS，RGDV和RGDF是血小板聚集过程中导致纤维蛋白原被糖蛋白IIb/IIIa识别并与纤维蛋白原结合的关键序列。采用RGDF或RGDS或RGDV或它们的相关序列占据血小板活化状态下糖蛋白IIb/IIIa上纤维蛋白原的结合位点是抑制由血小板通过纤维蛋白原与血小板交联构成的血栓的重要手段。 

在获得了结构式II代表的1，1-二甲基-β-咔啉羧酸在10^-8M浓度下能有效抑制大鼠活化的血小板表达P-选择素这样一个突破之后，把RGD肽及类似物AGD肽与之结合就成为发明人创造抑制溶解型P-选择素介导的由血小板通过纤维蛋白原与白血球交联构成的血栓和抑制糖蛋白IIb/IIIa介导的血小板通过纤维蛋白原与血小板交联构成的血栓的新型抗血栓剂的核心创新和关键技术。这种核心创新和关键技术的进步必然使本发明的化合物的抗血栓有效剂量大幅度下降。于是，发明人提出了本发明。 

发明内容

本发明的第一个内容是提供通式I代表的1，1-二甲基-β-咔啉羧酸修饰的RGD肽(式中AA₁为Ala时，AA₂为Val；AA₁为Ala时，AA₂为Phe；AA₁为Ala时，AA₂为Ser；AA₁为Arg时，AA₂为Val；AA₁为Arg时，AA₂为Phe；AA₁为Arg时，AA₂为Ser)。 

本发明的第二个内容是提供制备权利要求1的通式I代表的1，1-二甲基-β-咔啉羧酸修饰的RGD肽的方法，该方法由以下步骤构成： 

(1)在(Boc)₂O和NaOH存在下将Ala转化为Boc-Ala； 

(2)在无水THF中，在二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下将Boc-Ala与Tos·Gly-OBzl缩合生成Boc-Ala-Gly-OBzl； 

(3)在NaOH的水溶液中，将Boc-Ala-Gly-OBzl皂化为Boc-Ala-Gly；