[发明专利]一种快速微型化测定生物素的方法

说明书

技术领域

本方法属于微生物食品检测领域，涉及食品及发酵液中生物素含量的快速检测。

背景技术

生物素又称维生素B₇，维生素H，是一种具有高生物活性的物质，广泛分布于自然界中，是合成氨基酸、脂肪酸所必须的营养物质，并且参与体内碳水化合物的代谢。当人或者动物体内生物素缺乏时会出现食欲下降、生长缓慢、脱发或神经受损等问题。并且对谷氨酸等生物素缺陷型微生物的发酵起着重要作用，直接影响着菌体生长活力和发酵最终产量。

目前，生物素的测定方法很多，现在据文献报道的生物素测定方法就有：微生物法、滴定分析法、气相色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫法、荧光法、分光光度法、薄层色谱法。而在生物素的测定方法中，微生物法是最为灵敏并且应用最为广泛，适用于微生物的微量检测。其原理是在一定条件下，生物素的浓度与菌体的生长量呈线性关系，生物素浓度与菌体的生长量及生长速度成正比。微生物法可灵敏地检测出具有生物活性的生物素，这是微生物法区别于其他方法的最大特点。

现有技术的微生物法检测生物素多利用植物乳杆菌ATCC8014的生长对生物素的依赖性，通过光密度法测定细菌生长和繁殖的强度来间接地测定食物或发酵液中的生物素含量。传统测定方法采用试管作为培养装置，分光光度计作为检测装置，但是其具有以下不足之处：测试方法不够快速和便捷。

综上所述，本领域缺乏一种能够快速便捷测定食品及发酵液中生物素含量的方法。

因此，本领域迫切需要开发一种能够快速便捷测定食品及发酵液中生物素含量的方法。

发明内容

本发明旨在建立一种能够快速便捷测定食品及发酵液中生物素含量的方法。

本发明旨在建立一种24孔深孔板用于快速便捷测定食品及发酵液中生物素含量的用途。

在本发明的第一方面，提供了一种快速微型化测定生物素的方法，所述方法采用微生物检测方法，其包括如下步骤：

提供对生物素具有依赖性的菌种；

采用24孔深孔板作为培养设备，对所述菌种进行培养；

利用酶标仪对培养后的菌种进行检测，得到的菌体浓度用于间接地测定生物素。

在本发明的一个具体实施方式中，所述菌种选自植物乳杆菌ATCC8014。

在本发明的一个具体实施方式中，对所述菌种进行培养前，采用八道排枪接种。

在本发明的一个具体实施方式中，用于测定食品或发酵液中的生物素。

在本发明的一个具体实施方式中，测定时间在16-24h。

在本发明的一个具体实施方式中，测定灵敏度为不低于0.03ng。

在本发明的第二方面提供一种24孔深孔板的用途，其特征在于，用于生物素的测定。

附图说明

图1为24孔深孔板生物素测定曲线；

图2为48孔深孔板生物素测定曲线；

图3为96孔深孔板生物素测定曲线。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，通过改进制备工艺，获得了一种能够快速便捷测定食品及发酵液中生物素含量的方法。在此基础上完成了本发明。

本发明的技术构思在于：

本方法在原有微生物法检测生物素的基础上对培养、接种(任选)和检测设备进行了改进，例如采用24孔深孔板、八道排枪和酶标仪分别作为培养、接种和检测设备。该方法能够快速高效检测食品和发酵液中生物素含量。

本发明中，术语“含有”或“包括”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”或“包括”中。

方法

本发明提供一种快速微型化测定生物素的方法，所述方法采用微生物检测方法，其包括如下步骤：

提供对生物素具有依赖性的菌种；

采用24孔深孔板作为培养设备，对所述菌种进行培养；

利用酶标仪对培养后的菌种进行检测，得到的菌体浓度用于间接地测定生物素。

菌种

所述菌种选自植物乳杆菌ATCC8014。还可以是其他对生物素具有依赖性的菌种。

微生物法检测生物素多利用植物乳杆菌ATCC8014的生长对生物素的依赖性，通过光密度法测定细菌生长和繁殖的强度来间接地测定食物或发酵液中生物素的含量。

深孔板

所述深孔板选自24深孔板。