[发明专利]次血红素六肽衍生物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及次血红素六肽（Deuterohemin-His-Peptide，DhHP-6，次血红素代表符号Dh）衍生物及其制备方法和用途。具体地，本发明涉及经氮甲基化修饰的DhHP-6衍生物及其制备方法和活性测定。 

背景技术

肽类化合物是各类蛋白酶水解的底物，它们易被血液及组织中的多种蛋白酶降解。如氨基酸肽酶、羧基肽酶、二肽裂解酶、内切酶等。多肽这种被酶降解的特性是其作为药物开发的致命弱点。多肽类药物的生物利用度大都极低，其原因就是肽类物质体内半衰期很短，已经用于临床治疗的肽类药物的半衰期有些也仅仅为几十秒。它们被注射到体内，在到达作用靶点之前绝大部分已被各种蛋白酶水解成各种碎片。因此，将生物活性肽直接开发成用于临床治疗的肽类药物的受到很大限制。 

DhHP-6是含有次血红素和组氨酸残基的合成六肽化合物。是根据抗坏血酸过氧化物酶的结构，微过氧化物酶MP-9结构，以及以次血红素为靶分子筛选噬菌体展示肽库所得到的保守序列，是化学合成的过氧化物酶的模拟酶。与天然的过氧化物酶蛋白相比，短肽过氧化物模拟酶DhHP-6的化学稳定性强，但生物稳定性相对较差，该酶中与底物的结合部位---六肽序列极易被蛋白酶裂解成各种氨基酸残片，造成酶的生物利用度低。 

DhHP-6潜在的药物应用前景已见报道。中国专利CN200710056312.4报道了次血红素短肽化合物及在抗白内障药物制备中的用途。中国专利CN200910066991.2报道了次血红素短肽化合物在抗脑缺血药物制备中的用途。中国专利CN200610131682.5报道了三价铁卟啉短肽化合物在抗冠心病药物制备中的用途。吉林大学2008年王迪硕士论文对DhHP-6抗2型糖尿病作用及机理做了研究。 

为将DhHP-6开发成临床应用的高效抗氧化药物，需要延长该短肽过氧化物模拟酶的体内半衰期，增强抗酶解的稳定性，降低免疫原性和抗原性。采用化学修饰和改变剂型等方法能在不同程度上解决这些问题。DhHP-6与聚乙二醇（PEG）共价连接修饰和制备DhHP-6载药微球剂型是目前解决DhHP-6体内半衰期，延长生物利用度的两种途径（参见例如中国专利CN200810050307.7和CN200810051452.7）。PEG化学修饰方法一方面高分子量的聚合物聚乙二醇（分子量5000-5000道尔顿）的连接，减少了药物的肾排出，延长了体内代谢时间，另一方面大分子聚乙二醇对体内蛋白酶具有一定的遮挡和屏蔽作用，降低了蛋白酶对肽链的降解作用。但是，PEG屏蔽蛋白酶的同时也降低了肽链的活性部位与受体的结合机会，造成PEG修饰的药物与原药相比活性大幅度降低。一般仅为原药的百分之几到百分之十几。而载药微球则对制备工艺要求严格。 

发明内容

本发明人采用肽类分子位点变构的修饰方法，用N-甲基氨基酸替换多肽序列中某些位点的普通氨基酸。即把连接氨基酸的肽键-CONH-中的H以CH₃取代，从而形成部分位置氮甲基化的分子。氮甲基化修饰后的位点处，肽键的氮原子上的氢原子被甲基取代，阻断了蛋白酶对该处肽键的裂解，该分子可强有效地抵抗各类蛋白质水解酶的水解，如血清中以及胃肠道中的各种酶类。这样就提高了多肽的生物稳定性，并延长了体内半衰期。对多肽分子位点变构的氮甲基化修饰是开发肽类药物的口服制剂和长效制剂的理想途径。本发明制备了一系列氮甲基化的DhHP-6衍生物。酶学实验测定结果表明，这些氮甲基化的短肽具有显著的抗酶解稳定性，因此具有潜在的药物开发前景。 

在第一方面，本发明提供了一种次血红素六肽（DhHP-6）氮甲基化衍生物，其特征在于氨基酸序列为：Dh-βAHTVEK-X 

其中Dh为次血红素，βA为β丙氨酸，H为α组氨酸，T为α苏氨酸，V为α缬氨酸，E为α谷氨酸，K为α赖氨酸，X为游离羧基或酰胺基。 

并且其中：第2位的H与第3位的T之间键可为-CONH-或-CONCH- 3-; 

第3位的T与第4位的V之间键可为-CONH-或-CONCH₃-; 

第4位的V与第5位的E之间键可为-CONH-或-CONCH₃-;并且 

第5位的E与第6位的K之间键可为-CONH-或-CONCH₃-。 

在一个优选实施方案中，所述DhHP-6氮甲基化衍生物。其特征在于其结构为： 

Dh-βAH(-Me-)TVEK-X，结构代号1000； 

Dh-βAHT(-Me-)VEK-X，结构代号0100；