[发明专利]ITGA6基因突变检测特异性引物和液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种ITGA6基因突变检测特异性引物和液相芯片。

背景技术

ITGA6称为整联蛋白a6，英文名称为integrin alpha 6（Itga6），位于2号染色体2q31上。ITGA6基因属于Integrins基因家族，该家族的基因是一些与细胞粘附相关的表面受体蛋白。ITGA6基因通过形成alpha6beta 1-integrin或者是alpha6beta4-integrin，在细胞上表皮上的粘附、固着、迁移过程中起作用。ITGA6基因极有可能在动脉内膜脂质沉积、局限性斑块的形成方面、对动脉粥样硬化起着重要作用，目前研究表明，ITGA6的基因组序列与动脉粥样硬化和/或冠心病、前列腺癌、多发性骨髓瘤、缺血性中风、甲状腺乳头状癌、浆液性肿瘤等密切相关。

目前，ITGA6基因突变检测方法主要有：荧光定量PCR技术，直接测序法，以PCR为基础的检测技术直接测序法和荧光定量PCR技术，存在灵敏度低，样品易污染、假阳性率高的缺点，并且存在着检测通量的局限性，每次只能检测一种突变类型，不能满足实际应用的需要。

发明内容

本发明的目的之一是提供ITGA6基因突变检测液相芯片，该液相芯片可用于单独或并行检测ITGA6基因五种常见基因型A24240G、G1138A、A2082G、C251T和T13360C的野生型和突变型。

实现上述目的的技术方案如下：

一种ITGA6基因突变检测液相芯片，包括有：

（A）.针对ITGA6基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对A24240G位点的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12，针对G1138A位点的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14，针对A2082G位点的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16，针对C251T位点的SEQ ID NO.17及SEQ ID NO.18，和/或针对T13360C位点的SEQ ID NO.19及SEQ ID NO.20；所述tag序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10；

（B）.有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO.21～SEQ ID NO.30，且所述anti-tag序列能相应地与（A）中所选的tag序列互补配对；

（C）.用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。

在其中一个实施例中，所述扩增引物为：针对A24240G位点的SEQ ID NO.31及SEQ ID NO.32，针对G1138A位点的SEQ ID NO.33及SEQ ID NO.34，针对A2082G位点的SEQ ID NO.35及SEQ ID NO.36，针对C251T位点的SEQ ID NO.37及SEQ ID NO.38，和/或针对T13360C位点的SEQ ID NO.39及SEQ ID NO.40。

在其中一个实施例中，所述ASPE引物为：针对A24240G位点的由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.11组成的序列及由SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.12组成的序列，针对G1138A位点的由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.13组成的序列及由SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.14组成的序列，针对A2082G位点的由SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.15组成的序列及由SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.16组成的序列，针对C251T位点的由SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.17组成的序列及由SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.18组成的序列，和/或针对T13360C位点的由SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.19组成的序列及由SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.20组成的序列。

本发明的另一目的是提供用于ITGA6基因突变检测的特异性引物。

具体技术方案如下：