[发明专利]用高极性流动相检测含顺反异构的类胡萝卜素含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品分析与检测领域，涉及用高极性流动相检测含顺反异构的类胡萝卜素含量的方法。该方法采用高效液相色谱法高灵敏度简单测定类胡萝卜素含量。可以同时测定三种主要类胡萝卜素：番茄红素、γ-胡萝卜素、β-胡萝卜素的含量以及番茄红素、γ-胡萝卜素中顺反异构体的相对含量。

技术背景

高效液相色谱法（HPLC）因其检测的有效性和准确性而被广泛应用于类胡萝卜素含量的测定。通常情况下，类胡萝卜素的测定都用到了C18反相色谱柱为分离柱，用到了二氯甲烷作为流动相。二氯甲烷极性很低，在反相色谱柱中残留量大，对C18反相色谱柱损害大，严重缩短了色谱柱的使用寿命。高效液相色谱仪中的塑料材质的接头和垫圈也会受到二氯甲烷的腐蚀。这些不利因素使得以C18反相色谱柱为分离柱以二氯甲烷为流动相的色谱法来检测类胡萝卜素的含量受到了很大的限制。

因此，用一种不以二氯甲烷为流动相的色谱法来取代当前通用的C18柱为反相色谱柱以二氯甲烷为流动相的色谱法，对从事类胡萝卜素生产的科研单位和企业都具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种用高极性流动相检测含顺反异构的类胡萝卜素含量的方法。该方法在测定层面上客观真实的反映出番茄红素、γ-胡萝卜素、β-胡萝卜素的含量，同时也测定出番茄红素和γ-胡萝卜素中顺反异构体的相对含量，方法简单、测定准确、重现性好。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

用高极性流动相检测含顺反异构的类胡萝卜素含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

a.采用反相酰胺色谱柱；

b.以甲醇乙腈混合溶液作为色谱流动相，甲醇乙腈混合溶液中甲醇的体积百分比含量可以为0至50%之间；

c.所用条件为：柱温：室温；流速：0.2～0.6mL/min；检测波长440～490nm；进样体积5～20μL；

d.采用乙腈溶解样品。

作为上述技术方案的改进，所述的反相酰胺色谱柱为AscentisRP-Amide规格为150mm×2.1mm,5μm或Halo RP-Amide规格为150mm×3.0mm，2.7μm。

与现有技术相比，本发明具有的优点和效果如下：

1.本发明的检测分析方法分辨率、灵敏度高、重现性好、简单易行。

2.本发明不用二氯甲烷为流动相，避免了二氯甲烷对色谱仪和色谱柱的腐蚀和堵塞，延长了色谱柱的使用寿命。

3.有效的检测出番茄红素和γ-胡萝卜素中顺反异构体的相对含量。传统C18柱检测分析方法，不能检测出番茄红素和γ-胡萝卜素的顺反异构体。

4.对色谱仪要求低，单泵系统即可完成检测分析，适用性广。

附图说明

图1是传统的C18色谱柱检测分析色谱图；

图2是实施例1的Ascentis RP-Amide色谱柱检测分析色谱图；

图3是实施例2的Ascentis RP-Amide色谱柱检测分析色谱图；

图4是实施例3的Ascentis RP-Amide色谱柱检测分析色谱图；

图5是实施例4的Halo RP-Amide色谱柱检测分析色谱图；

图6是实施例5的Halo RP-Amide色谱柱检测分析色谱图；

图7是实施例6的Halo RP-Amide色谱柱检测分析色谱图。

具体实施方式

图1是传统的C18色谱柱HPLC检测分析得到的色谱图，该检测分析方法的仪器与条件为：a.高效液相色谱仪：Agilent 1100；b.色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18（250mm×4.6mm,5μm）；c.流动相：二氯甲烷乙腈（3:7）；流速：1mL/min；检测波长：472nm；柱温：室温；进样体积：5μL）。该方法不能检测分析出番茄红素和γ-胡萝卜素的顺反异构体。

图2，图3，图4，图5，图6，图7是本发明提供的HPLC检测分析方法得到的色谱图。本发明的检测方法能检测分析出番茄红素和γ-胡萝卜素的顺反异构体。图1，图2，图3，图4，图5，图6，图7是对同一种类胡萝卜素样品检测分析，采用不同的高效液相分析方法得到的HPLC色谱图。

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

仪器与条件

高效液相色谱仪：Agilent 1200；