[发明专利]一种诱导巴西人参直接建成完整组培苗的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物的组织培养领域，具体涉及一种诱导巴西人参直接建成完整组培苗的方法。

背景技术

巴西人参(Pfaffia paniculata)亦称珐非亚(Pfaffia)，系觅科(Amaranthaccac)牛膝属多年生草本植物，原产南美洲巴西等国的热带雨林地区。巴西人参以根入药，富含多种氨基酸、维生素、矿物质和皂甙，具有明显的抗炎、镇痛、壮阳和抗肿瘤作用。

为扩大我国的药用植物资源，中国医学科学院药用植物研究所和广西药用植物园先后引种成功。但是，对其组培苗生产技术的研究较少，仅见凌征柱等人利用细胞分裂素N⁶-卞基腺嘌呤(BA)和生长素萘乙酸(NAA)，按照诱导外植体腋芽萌发、无根苗继代扩繁、诱导生根的常规组织培养程序才获得完整的组培苗[种子，2006，25(10)：20～21]。按照以上过程，获得完整组培苗至少需要三种不同的复合型培养基，操作比较繁杂，且40天的培养周期增殖倍数仅达3.9。

发明内容

为简化巴西人参组培苗的建成过程，提高生产效益，获得优质组培苗，本发明的目的在于提供一种诱导巴西人参直接建成完整组培苗的方法。

本发明利用新型植物生长物质灵发素LFS(Lingfasu，亦称狭霉素，代号PGR-08)同时具有细胞分裂素和生长素两类植物生长调节剂生物活性的特点，将LFS加入到常规MS固体培养基中，诱导巴西人参直接建成完整组培苗。

本发明提供的诱导巴西人参直接建成完整组培苗的方法，包括如下步骤：

将经表面灭菌的巴西人参外植体带腋芽茎段接种到含有灵发素LFS的MS固体培养基上，常规培养，直到获得根苗齐全的巴西人参完整组培苗。

其中，获得所述巴西人参外植体带腋芽茎段的具体方法为：从巴西人参无病毒健康植株上采集已经硬化的幼枝，流水冲洗，擦干，切去顶芽和叶片，保留部分叶柄以保护腋芽，再分切成带腋芽的单节茎段作为巴西人参外植体带腋芽茎段。

其中，所述表面灭菌的具体方法为：在净化工作台上，将外植体带腋芽茎段用75％酒精消毒，再用0.1％升汞消毒，消毒后用无菌水冲洗。

其中，所述MS固体培养基含灵发素LFS的浓度为0.1-1.0mg/L，优选为0.3mg/L。

其中，所述常规培养的培养条件为，白天温度26-30℃，夜间温度20-24℃，光照时间11小时/天，光照强度1500lx。

按照本发明的方法所获得的巴西人参组培苗，作为组培扩繁增殖材料的应用，具体为将获得的组培苗切除根、顶之后，切割为单节带腋芽茎段，作为外植体带腋芽茎段使用。

本发明还提供一种诱导巴西人参建成完整组培苗的方法在巴西人参良种繁育中的应用。

本发明还提供灵发素LFS在诱导巴西人参建成完整组培苗中的应用。

本发明的有益效果在于：

1)本发明中，添加了灵发素LFS的MS固体培养基适用于常规组织培养中诱导外植体腋芽萌发、继代苗扩繁增殖及继代苗生根这三个生产环节，无需再添加任何其它激素或调节剂，就能诱导巴西人参茎段腋芽迅速正常萌发生长，并形成不定根，直接建成根苗齐全的完整组培苗，使繁殖周期缩短为20d；

2)本发明使用添加了灵发素LFS的MS固体培养基完成常规要用三种复合培养基才能完成的巴西人参组培苗生产全过程，大大简化培养基的配制和生产操作程序；

3)使用本发明组织培养巴西人参，增殖倍数显著变大，生产效率成倍增加；

4)使用本发明组织培养巴西人参，获得的组培苗根系发达，其质量显著提高。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1诱导巴西人参外植体腋芽萌发

利用本发明诱导巴西人参外植体腋芽萌发。

从防虫网内的无病毒健康植株上采集已经硬化的幼枝，到室内流水冲洗表面尘埃，干毛巾除去游离水，切去顶芽和叶片，保留部分叶柄以保护腋芽，再分切成带腋芽的单节茎段作外植体带腋芽茎段。

将外植体带腋芽茎段在净化工作台上用75％酒精消毒30sec，再用0.1％升汞消毒5min，消毒后用无菌水冲洗6遍。