[发明专利]一种丰水梨试管苗生根的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，更具体是涉及一种丰水梨试管苗生根的制备方法，适用于利用组织培养方法快速繁殖大量丰水梨自根试管苗，满足种苗市场的需要。

背景技术

丰水梨（Pyrus pyrifolia‘Hosui’）是日本农林省果树试验场1972年命名的优质大果褐皮沙梨品种，亲本为（菊水×八云）×八云，近年已在日本逐渐发展成为主栽品种之一。果重200g-300g，最高达500g，果实圆形或近圆形，果皮黄褐透亮，大型果有综沟。果肉雪白，肉质细嫩，特酥脆，汁多，甜酸适口，风味特好，品质极佳，较耐贮藏。果实发育期为135d-140d，以短果枝结果为主，中、长果枝及腋花芽较多，花芽容易形成，连续结果能力较强，丰产性较好，抗病性中等。

目前欧洲在西洋梨栽培中逐渐采用自根苗代替传统嫁接苗以解决栽培过程中的连作障碍问题。而组织培养是快速繁殖优良自根苗的一条重要途径，试管苗的生根培养则是快繁过程中至关重要的环节。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种丰水梨试管苗生根的制备方法，方法易行，操作简便，解决了丰水梨试管苗组织培养过程中难生根的问题，生根率高、根系发达且移栽成活率高。

为了实现上述的目的，本发明通过下述技术方案实现：

一种丰水梨试管苗生根的制备方法，该方法包括如下步骤：

本发明的工作过程步骤包括：（A）无菌试管苗培育；（B）试管苗继代增殖；（C）试管苗生根诱导；（D）试管生根苗移栽。

A、取丰水梨一年生枝茎段培育无菌试管苗；其特征在于：步骤（A）所述无菌试管苗培育方法是于生长季剪取大田丰水梨一年生枝，切成带腋芽茎段约1.5cm-2.0cm进行消毒处理（消毒方法为：先用70%（体积比）酒精消毒30s，不断的摇动以便充分消毒。倒掉酒精，用无菌水冲洗2次，每次清洗2min，再用1%-2%（体积比）次氯酸钠溶液（滴入1-2滴吐温）消毒20min，倒掉次氯酸钠溶液，用无菌水冲洗3-5次），消毒后的茎段上端切成平面，减少水分散失，基部切成斜面插入到腋芽培养培养基中，进行昼夜光照周期培养。光照强度为2000lux-3000lux，培养温度为23℃-27℃，光周期为16h/8h；所述的茎段培养培养基配方为：LP基本培养基+IBA0.4mg/L+6-BA0.5mg/L+泛酸钙1.0mg/L+生物素0.1mg/L+核黄素0.5mg/L+维生素C1.0mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂6.8g/L，pH：5.8-6.0。所述的生物素和维生素H是同义词，维生素H又称生物素、辅酶R，是水溶性维生素，也属于维生素B族。它是合成维生素C的必要物质，是脂肪和蛋白质正常代谢不可或缺的物质。是一种维持人体自然生长和正常人体机能所必须的水溶性维生素。

B、无菌试管苗继代增殖；步骤（B）所述芽的增殖方法是将培养28d-32d后无菌且生长健壮的腋芽苗从茎段上切下接种于继代培养基中，稍带部分木质部，利于植株生长，以后每28d-32d继代一次，以步骤（A）所述条件进行昼夜光照周期培养。在生长形成1.5cm及以上高度的可进行生根培养的试管苗的同时，可形成2-5个新芽以进行继代增殖培养；所述试管苗继代增殖培养基为：LP基本培养基+IBA0.4mg/L+6-BA0.5mg/L+泛酸钙1.0mg/L+生物素0.1mg/L+核黄素0.5mg/L+蔗糖20.0g/L+琼脂6.8g/L，pH：5.8-6.0。

C、将丰水梨试管苗转入生根培养基中，诱导生根；步骤（C）特征在于：待步骤（B）的试管苗生长到1.5cm及以上，将其切成单株，接种到第一生根培养基上先暗培养6d-8d，再光培养2d-4d，再转接到第二生根培养基中光培养23d-27d获得生根植株，培养条件为步骤（A）所述的昼夜光照周期培养；