[发明专利]鸭病毒性肝炎和鸭瘟二联高免卵黄抗体注射液及其制备方法

权利要求书

1.一种鸭病毒性肝炎和鸭瘟二联高免卵黄抗体注射液，其特征在于，由以下重量百分数的组分组成：鸭病毒性肝炎卵黄抗体50-60%、鸭瘟卵黄抗体35-45%、辛酸0.8-1.0%、甲醛0.2-0.3%、硫柳汞0.01-0.02%及余量的水。

2.一种如权利要求1所述鸭病毒性肝炎和鸭瘟二联高免卵黄抗体注射液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：分离毒株制备疫苗，免疫健康鸭群制得蛋，将蛋经过消毒、酸化处理、辛酸处理、精制提取净化处理、配制、分装得到鸭病毒性肝炎和鸭瘟二联高免卵黄抗体注射液。

3.根据权利要求1所述的鸭病毒性肝炎和鸭瘟二联高免卵黄抗体注射液的制备方法，其特征在于，具体步骤是：

1）分离毒株制备疫苗：本次病毒样品主要从江苏南京和福建分别采集鸭病毒性肝炎样品和鸭瘟样品，经过无菌采集临床上发病症状明显的病例，将采集的样品研磨，经过3次冻融，15000rpm/min高速离心留取上清液，将上清液接种于鸡胚囊中传代经过62代的传递，根据传代胚胎病变和人工致病试验，验证得弱毒株JSNJ62株；鸭瘟病毒株经过上述的方式得到病毒株FJ株，根据GenBank登录号为EF643557公布UL28基因序列设计引物，扩增产物经胶回收纯化后，连接至PMD18-T载体并转化感受细胞DH5α，测序，得到克隆完整UL28基因序列2415bp；

2）免疫健康鸭群制得蛋：采用自备的鸭病毒性肝炎灭活疫苗和鸭瘟灭活疫苗对健康鸭群交替免疫，免疫接种鸭病毒性肝炎灭活疫苗1.5mL（含毒10^3.2ELD₅₀/0.1mL）和鸭瘟灭活疫苗1.5mL（含毒10^2.8ELD₅₀/0.1mL），第一次免疫健康鸭群使用鸭病毒性肝炎灭活疫苗，每次免疫间隔7天时间，以后免疫加1倍量，两种疫苗交替免疫，交替免疫三次，第二次免疫后开始抗体效价检测，使抗体效价达到1：256时，开始收集种蛋；开始收集蛋，收集的蛋进行清理、消毒，晾干备用；

3）水稀释法酸化处理：分离蛋卵黄，加入等体积的无菌水，搅拌混匀至颜色发白，得到卵黄溶液；将卵黄溶液放入60-65℃水浴锅内均匀加热30min，然后加入pH为4.8-5.2、温度为4-6℃的酸化水溶液，加入量为卵黄溶液体积的6倍，混匀，放置4℃环境中4-8h静置沉淀，取上清液，离心20min，15000rpm/min，留上清液；

4）辛酸处理：向步骤3）上清液中加入辛酸，辛酸加入量为溶液体积的0.8-1.0%，混匀，静置，弃去杂质漂浮物，离心10min，20000rpm/min，留取上清液，静置；

5）对步骤4）所得上清液依次用0.45mm的滤膜截流分子量为200KD的大分子物质，留取滤液；

6）向步骤5）所得滤液加入甲醛、硫柳汞，甲醛的加入量为0.2-0.3%，硫柳汞为0.01-0.02%；

7）除菌滤膜进行过滤，分装，保存。