[发明专利]防治桃小食心虫的白僵菌制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物制剂，具体属于一种用于防治桃小食心虫的球孢白僵菌制剂及其制备方法。

背景技术

桃小食心虫（简称桃小）是危害严重的果树食心虫类害虫。在北方果园普遍发生，危害苹果、枣、梨、桃、杏、山楂等10多种果树的果实，给果农造成很大的经济损失。以往主要使用化学杀虫剂对桃小进行防治。不仅会引起环境污染、杀伤天敌昆虫、使害虫产生抗药性等一系列问题。而且还会造成农药残留，降低果实的品质。应用昆虫病原菌开展生物防治，是实现害虫可持续控制的重要途径。我国从20世纪70年代以来，就开始了利用白僵菌防治桃小食心虫的研究，取得了很大成绩。

但是，第一由于桃小食心虫是蛀果害虫，整个幼虫生长期都在果实内部。而现在常用的防治方法是先用监测预报方法查知越冬幼虫出土盛期及成虫出现期后，再施用化学或生物杀虫剂，一季需要喷施2~3次。需要较大的人力和物力进行监测和实施。第二，由于白僵菌生长繁殖一般需要较高的湿度和适当的温度。在北方成功应用白僵菌防治桃小食心虫就要求有适应北方干旱低温环境的本地优良菌种，即必须获得北方环境中自然生存的桃小食心虫病原白僵菌的菌种，开发出适应北方地区的应用技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种防治桃小食心虫的白僵菌制剂，特别是适用于北方干旱低温地区防治桃小食心虫的白僵菌制剂，以及制备该制剂的方法。

本发明提供的一种防治桃小食心虫的白僵菌制剂，是采用保藏号为CGMCC No.4526的球孢白僵菌（Beauveria bassiana）菌种，通过固体培养，将培养物与营养型填料配制而成。

所述的菌种，是发明人2009年从采自山西省襄汾县苹果园自然罹病的桃小越冬幼虫上分离获得的，分类命名：球孢白僵菌(Beauveria bassiana)，该菌种的菌株已于2011年1月5日保藏在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，菌种保藏号为CGMCC No.4526。

本发明提供的一种防治桃小食心虫的白僵菌制剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)一级斜面菌种培养：将保藏号为CGMCC No.4526的球孢白僵菌菌种接入装有含健康桃小食心虫虫尸浸出液的PDA斜面培养基的试管中，放入培养箱，在温度为20℃-28℃、相对湿度为70％-85％条件下培养，待菌丝长满斜面并产满孢子时备用；一般培养时间为8-12天。

(2)二级菌种培养：在无菌条件下，将培养好的一级斜面菌种连同培养基一起刮下，放入含有液体培养基的三角瓶中培养，接种量为每一试管菌种接种3瓶，将接种后的三角瓶放入恒温震荡培养箱，20℃-28℃、150-200r/min，培养至培养液中长满菌丝球时备用；一般培养时间为10-15天。

(3)三级固体扩大培养：在无菌条件下，将二级菌种，按体积比为1∶10-25的接种量接入灭过菌的固体培养基中，在温度为20℃-28℃、相对湿度为70％-85％条件下培养，至培养基上长满白色菌丝，即得三级培养物；一般培养时间为25-30天。

(4)菌粉制剂制备：将原料按重量百分比计麦麸60-80，谷壳20-40（优选：麦麸70，谷壳30）混匀，并按原料总重量加水60％-80％搅拌均匀，灭菌，冷却至室温后，即得填料；将填料与三级培养物按1-3∶1比例在无菌室内搅拌均匀，分装，即得白僵菌菌粉制剂；

其中，所述的含健康桃小食心虫虫尸浸出液的PDA斜面培养基配比为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，桃小食心虫幼虫干虫尸10g/L。

所述的液体培养基为SDAY培养基，其成份及配比为：蛋白胨10g/L，酵母膏2g/L，葡萄糖40g/L；

所述的固体培养基通过如下方法制得：按重量百分比计，将原料麦麸68-72，谷壳26-30，奶粉1-4（优选：麦麸70，谷壳28，奶粉2）混匀，并加入原料总重量60％-80％的水，搅拌均匀，灭菌制得。

本发明白僵菌菌粉制剂，可用于防治桃小食心虫，特别是适用于北方干旱低温地区防治桃小食心虫，也可用于气候温暖湿润地区防治桃小食心虫使用。防治效果可达82.1%-90.5%。当年果园蛀果率降低83.8%-93.6%。